用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)構(gòu)建的蛋白酶檢測(cè)器.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)構(gòu)建的蛋白酶檢測(cè)器姓名：齊小娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生理學(xué)（病理生理學(xué)）指導(dǎo)教師：余應(yīng)年20050501浙江大學(xué)碩十學(xué)何論文 齊小娟用熒光共振能構(gòu)建的蛋白浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院：碩士研究生：導(dǎo) 師：量轉(zhuǎn)移技術(shù)酶檢測(cè)器生理學(xué)齊小娟余應(yīng)年教授中文摘要1 背景及目的自1 9 4 8 年F o r s t e r 等人提出熒光共振能量轉(zhuǎn)移( f l u o r e s c e n c er e s o n a

2、 n c ee n e r g yt r a n s f e r , F R E T ) 理論后，因其對(duì)距離的極度敏感性，F(xiàn) R E T 技術(shù)被廣泛用于生物大分子結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、反應(yīng)機(jī)理以及定量分析等方面的研究。而在維多利亞水母中發(fā)現(xiàn)的綠色熒光蛋白( g r e e n f l u o r e s c e n c ep r o t e i n ，G F P ) 及其變體的成功克隆和分離，為F R E T 技術(shù)提供了適宜的供受體對(duì)，大大促進(jìn)了

3、F R E T 技術(shù)的發(fā)展。近來(lái)，F(xiàn) R E T 以它穩(wěn)定、無(wú)生物毒性、不需任何外源反應(yīng)底物及表達(dá)無(wú)種屬和組織特異性的優(yōu)點(diǎn)，成為檢測(cè)蛋白一受體、蛋白一蛋白之間相互作用和相對(duì)空間位置的“分子尺”。以F R E T 技術(shù)構(gòu)建的生物傳感器具有高靈敏度和高特異性，成為高通量篩選( H i g h T h r o u g h p u tS c r e e n ．H T S ) 的最好系統(tǒng)之～。前列腺特異抗原( p r o s t a t e s

4、p e c i f i ca n t i g e n ，P S A ) 是一種主要由前列腺上皮層分泌的絲氨酸蛋白酶，是目前臨床上對(duì)前列腺癌進(jìn)行早期診斷及監(jiān)測(cè)的敏感的血清學(xué)指標(biāo)。然而血清P S A 水平并不具有疾病特異性，一些良性的前列腺疾病如前列腺增生等亦會(huì)引起血清總P S A 含量的升高，尤其是血清中的總P S A 含量在4 ～1 0 n ∥m l 之間時(shí)，更難以做出鑒別診斷。因而其作為前列腺癌早期診斷指標(biāo)的特異性還有待提高。研究表明