組織處理對形態(tài)定量研究的影響.pdf

1、第一部分放大倍數(shù)和包埋介質(zhì)對睪丸組織Jr-5態(tài)定量研究的影響 研究背景與目的： 形態(tài)定量研究中，我們通常利用組織切片，根據(jù)體視學原理測量切片上觀察到的圖像，由此估計組織結(jié)構(gòu)的形態(tài)定量特征。由于切片受取材、固定、脫水、包埋、切片、裱片和染色以及顯微分辨率和放大倍數(shù)等諸多因素的影響，不同條件下測得的結(jié)果可能不同。這是一個基本而又重要的問題，但可能是因為影響因素(包括測量方法)太多，對這個問題的系統(tǒng)研究或綜述相對很少。筆者實驗

2、室以前對比過國產(chǎn)石蠟與環(huán)氧樹脂包埋對睪丸組織形態(tài)定量研究的影響，最近又對比了國際上常用的Leica石蠟和甲基丙烯酸樹脂包埋以及放大倍數(shù)對腎臟組織形態(tài)定量研究的影響。本文擬進一步對比Leica石蠟和甲基丙烯酸樹脂包埋以及不同物鏡(不同分辨率和放大倍數(shù))對睪丸組織結(jié)構(gòu)形態(tài)定量研究的影響。 方法： 動物：6只正常成年(8．6-9．6月齡)雄性新西蘭大耳白兔。麻醉后取每只兔的一側(cè)睪丸(3只取自左側(cè)，3只取自右側(cè))。經(jīng)Bouin液

3、浸潤固定和70％乙醇脫水處理后，從每個睪丸的中央及兩端切取共3個平行組織薄片。將每個組織薄片從中央一分為二，任意取一塊再將其一分為二得到2個扇形(1／4圓)組織塊，1塊用于石蠟包埋，1塊用于羥乙基甲基丙烯酸樹脂包埋。從每個組織塊切取1張完整的(扇形)切片：石蠟切片厚度7／xm，樹脂切片厚度25gm；切片平面垂直于睪丸長軸。切片均用PAS(過碘酸及Schiff試劑)染色，然后用Harris蘇木精復染。 利用不同分辨率和放大倍數(shù)的物

4、鏡(10×、20x、40x物鏡和100x油鏡)在電腦顯示器上分別觀察、測量石蠟切片和甲基丙烯酸樹脂切片，根據(jù)體視學中的測點計數(shù)方法估計睪丸內(nèi)生精小管、間質(zhì)及其中的空隙(人工假象)、生精細胞核的體積分數(shù)，根據(jù)禁線法則隨機抽選圓形或橢圓形有管腔的生精小管輪廓并測量其直徑，根據(jù)光學體視框技術(shù)隨機抽選早期圓形精子細胞核并測量其直徑。 結(jié)果： 不同放大倍數(shù)對生精小管體積分數(shù)的估計無顯著性影響。 與樹脂切片相比，從石蠟切片估

5、計的生精小管的體積分數(shù)顯著減少了16．9％-17．5％。從樹脂切片內(nèi)不同部位(即距白膜不同距離抽選視野)所估計的生精小管的體積分數(shù)相似，而從石蠟切片內(nèi)不同部位所估計的結(jié)果有所不同：距離白膜愈遠，所估計的結(jié)果趨于愈小。石蠟切片上生精小管之間出現(xiàn)明顯的空隙——沒有任何組織結(jié)構(gòu)的人工假象，睪丸內(nèi)空隙的體積分數(shù)高達20％-24％，而樹脂切片上幾乎沒有這種人工假象。從石蠟切片估計的生精小管直徑、生精小管內(nèi)生精細胞核的體積分數(shù)和早期圓形精子細胞核的

6、直徑，比從樹脂切片估計的結(jié)果分別顯著減少了17．1％、26．6％和1O．8％。 結(jié)論： 在能清晰觀察所測結(jié)構(gòu)的范圍內(nèi)，放大倍數(shù)和分辨率對所測結(jié)構(gòu)體積分數(shù)估計的影響不大。但包埋介質(zhì)對睪丸組織形態(tài)定量研究的影響較大：與樹脂包埋相比，石蠟包埋使生精小管和細胞核嚴重皺縮，小管之間出現(xiàn)嚴重的人工假象——空隙，該假象在愈遠離睪丸白膜的切片部位趨于愈明顯。 第二部分固定與脫水對睪丸、附睪和眼球的密度與體積的影響

7、 研究背景與目的： 體視學形態(tài)定量研究中，為估計器官內(nèi)待測結(jié)構(gòu)的總體積、總表面積或總長度，我們先利用器官的切片來估計待測結(jié)構(gòu)的相對量——單位體積器官內(nèi)結(jié)構(gòu)的量，然后將相對量乘以器官的體積。該器官體積最好是活體器官的體積或取材時“新鮮"狀態(tài)下的器官體積。但是，人們常常在固定或脫水后才分離器官并稱重(以估計器官體積)，而沒有獲得新鮮狀態(tài)下器官的體積。所以，有必要了解器官組織在固定和脫水過程中的體積變化，但這方面的研究數(shù)據(jù)缺乏。因此

8、本實驗以大鼠睪丸、附睪和眼球以及兔睪丸為例，探討這些器官經(jīng)Bouin液固定(浸潤或灌注固定)和70％乙醇脫水后的密度與體積變化，為形態(tài)定量研究提供重要的基本數(shù)據(jù)。 方法： 分別在取材時(新鮮狀態(tài))、Bouin液浸潤固定24～36小時后、70％乙醇脫水2～7天后，測量SD大鼠的睪丸、附睪尾和眼球以及兔睪丸的密度與重量，并根據(jù)密度與重量計算器官體積。器官的密度利用不同濃度(比重)的乙醇和蔗糖溶液測量，器官的重量用電子天平稱得

9、。 結(jié)果： 新鮮狀態(tài)下器官的密度約為1．04(大鼠睪丸、附睪和兔睪丸)或1．05(大鼠眼球)，固定后增至1．09(大鼠睪丸、附睪和兔睪丸)或l.11(大鼠眼球)，脫水后又降至0．93(大鼠睪丸)、0．94(大鼠附睪和兔睪丸)或O．95(大鼠眼球)。與新鮮狀態(tài)的體積相比，經(jīng)固定且脫水后的器官體積或者無顯著變化(大鼠睪丸)，或者增加5～7％(大鼠附睪)，或者減少3～5％(大鼠眼球和兔睪丸)。 結(jié)論： 固定和脫