急性壞死性胰腺炎大鼠腸梗阻機制及奧曲肽干預對腸道動力的影響.pdf

1、目的:急性胰腺炎是臨床上嚴重威脅生命的常見疾病，其總死亡率是10-25％，重癥胰腺炎死亡率接近30-40％。40-70％的急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)的病人出現(xiàn)的繼發(fā)性胰腺感染成為晚期死亡率的最重要的決定因素?，F(xiàn)有很多研究證實了ANP急性期的胃腸動力改變，推測動力障礙與導致腹腔內(nèi)器官感染的細菌的過度生長相關(guān)，參與了全身性炎癥反應(yīng)和難治的多器官功能衰竭的病理生理過程。然而導致AN

2、P相關(guān)的腸梗阻的潛在機制目前并不明確，其發(fā)生原因可能包括調(diào)節(jié)動力的神經(jīng)源性(腸神經(jīng))或肌源性(平滑肌，interstitial cells of Cajal，ICC)機制的損傷或改變。本課題旨在探究ANP病程中小腸動力的損害，及其相關(guān)肌源性(ICC)和神經(jīng)源性機制及奧曲肽干預對腸道動力的影響及其相關(guān)機制。
　　 方法:采用雄性SD大鼠腹腔內(nèi)注射30％L-鳥氨酸(3g/kg)的方法建立ANP模型，藥物干預采用奧曲肽，每8h皮下注射

3、。從功能學、形態(tài)學和分子生物學三方面，觀察造模后24h、48h、72h小腸動力相關(guān)的ICC、平滑肌和腸神經(jīng)的變化及給予奧曲肽干預對這些動力相關(guān)機制的影響。功能學分為在體小腸埋置電極記錄其肌電活動的慢波和移行性肌電復合波(migrating myoelectric complexs，MMC)和離體器官浴槽灌流技術(shù)記錄小腸的自發(fā)收縮情況和相關(guān)藥理學實驗。形態(tài)學包括觀察胰腺病理、ICC和神經(jīng)源性一氧化氮合酶(neuronal nitric o

4、xide synthase，nNOS)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(cholineacetyltransferase， CHAT)、生長抑素(Somatostatin，SST)受體陽性神經(jīng)的免疫熒光實驗。分子生物學實驗包括研究ICC、nNOS和CHAT的蛋白表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.ANP大鼠在造模后24h、48h和72h三個時間點均出現(xiàn)急性壞死性胰腺炎的胰腺典型病理表現(xiàn)。
　　 2.急性壞死性胰腺炎大鼠造模后24

5、h小腸推動率降低(P=0.002)；較造模前基礎(chǔ)值相比，小腸肌電活動出現(xiàn)慢波主功率和主頻率均降低(主頻率：P=0.005；主功率：P=0.034)，快波的MMC周期延長(P=0.052)；小腸自發(fā)收縮的振幅較對照組降低(P=0.004)；藥理學實驗對ACh的反應(yīng)較對照組減弱(P=0.05)，而對KCI的反應(yīng)較對照組無顯著變化(P=0.505)，對照組加入TTX后收縮張力減弱(P=0.045)而ANP組則未出現(xiàn)此變化(P=0.197)，對

6、L-NNA的反應(yīng)ANP組亦較對照組減弱(P=0.042)。免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn)ICC的兩個亞型ICC-MY和ICC-DMP的熒光密度均較對照組減弱(ICC-MY，P=0.000；ICC-DMP，P=0.000)，PGP9.5標記的腸神經(jīng)熒光密度較對照組減弱(P=0.001)，nNOS神經(jīng)元數(shù)目也較對照組減少(P=0.000)。Western blot顯示nNOS蛋白表達較對照組減弱(P=0.032)。
　　 3.造模后24h、48h

7、和72h三個時間點觀察到，ANP+生理鹽水組慢波的主頻率均較基礎(chǔ)值顯著降低(24h，P=0.046;48h，P=0.017；72h,P=0.004)；而ANP+奧曲肽組則在造模后三個時間點較基礎(chǔ)值均無顯著差別；而在同一時間點內(nèi)，ANP48h和ANP72h，給予ANP+奧曲肽組主頻率明顯高于ANP+生理鹽水組(48h，P=0.021；72h，P=0.081)。ANP+生理鹽水組MMC周期在48h和72h時間點較基礎(chǔ)值顯著延長(48h，P=

8、0.002；72h，P=0.006)，此變化趨勢未發(fā)現(xiàn)于ANP+奧曲肽組；同慢波主頻率變化類似，同一時間點內(nèi)，ANP48h和ANP72h ANP+奧曲肽組MMC周期顯著較ANP+生理鹽水組縮短(48h，P=0.005；72h，P=0.004)。免疫熒光結(jié)果顯示：ICC-DMP在48h和72h時間點，ANP+奧曲肽組較ANP+生理鹽水組累計熒光密度顯著增強(48h，P=0.028；72hP=0.01)。Western blot顯示在72h

9、時間點c-Kit的蛋白表達ANP+奧曲肽組顯著高于ANP+生理鹽水組(P=0.017)。
　　 4.小腸離體收縮振幅在ANP造模后24h和48h時間點，ANP+生理鹽水組較對照組有顯著減低(24h，P=0.004；48h，P=0.011)，而此變化趨勢未發(fā)現(xiàn)于ANP+奧曲肽組；在對照組內(nèi)和ANP24 h和48 h時間點內(nèi)，各自小腸收縮振幅奧曲肽干預組均優(yōu)于生理鹽水干預組(對照組內(nèi)，P=0.016；ANP24 h內(nèi)，P=0.000

10、；ANP48 h內(nèi)，P=0.008)。藥理學實驗發(fā)現(xiàn)小腸收縮振幅對ACh的反應(yīng)，在24h時間點，ANP+奧曲肽組顯著大于ANP+生理鹽水組(P=0.002)；對L-NNA的收縮反應(yīng)，在24h時間點，ANP+奧曲肽組與ANP+生理鹽水組有顯著差異(P=0.053)。免疫熒光結(jié)果顯示CHAT陽性神經(jīng)元ANP+生理鹽水組造模后三個時間點均較對照顯著減少(24h，P=0.000；48h，P=0.000；72h，P=0.005)；而在24h和48

11、h時間點內(nèi)，ANP+奧曲肽組的CHAT陽性神經(jīng)元數(shù)目高于無干預組(24h，P=0.034；48h，P=0.024)。與CHAT神經(jīng)類似，nNOS陽性神經(jīng)元在ANP+生理鹽水組造模后三個時間點均較對照顯著減少(24h，P=0.000;48h，P=0.000；72h，P=0.000)；而在24h和48h時間點內(nèi)，ANP+奧曲肽組的nNOS陽性神經(jīng)元數(shù)目高于ANP+生理鹽水組(24h，P=0.003；48h，P=0.046)。Western

12、blot在ANP24h時間點奧曲肽干預組較生理鹽水干預組CHAT神經(jīng)的蛋白表達增高(P=0.057)。而nNOS神經(jīng)的蛋白表達則在48h時間點奧曲肽干預組顯著高于生理鹽水組(P=0.032)。
　　 結(jié)論:ANP病程中出現(xiàn)小腸動力功能紊亂，其潛在機制涉及調(diào)節(jié)動力的神經(jīng)源性(腸神經(jīng)：nNOS、CHAT神經(jīng)元)或肌源性(平滑肌、ICC)機制的改變。奧曲肽的干預，一定程度上保護了ICC和nNOS、CHAT神經(jīng)，部分逆轉(zhuǎn)了其相關(guān)動力障礙