DBA-2小鼠聽覺中樞退行性變及其發(fā)病機(jī)制的探討.pdf

1、【目的】：
　　觀察DBA/2小鼠耳蝸核、下丘和聽皮層三級(jí)聽覺中樞增齡性退變并探討其發(fā)病機(jī)制。
　　【方法】：
　　選擇3周齡,8周齡,12周齡,8月齡DBA/2小鼠檢測其ABR(4KHZ,8KHZ,16KHZ,32KHZ)閾值,了解其聽力隨年齡增長的變化趨勢。HE染色、甲苯胺藍(lán)染色、透射電鏡等方法觀察不同年齡DBA/2小鼠耳蝸核、下丘、聽皮層細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量及細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)的變化。提取耳蝸核、下丘、聽皮層組織DNA,實(shí)時(shí)

2、定量PCR技術(shù)檢測線粒體DNA3873bp缺失突變率及COX3基因相對拷貝數(shù)。免疫組織化學(xué)方法檢測COX3在聽覺中樞的定位表達(dá)。
　　【結(jié)果】：
　?、貯BR閾值檢測顯示DBA/2小鼠的ABR閾值隨年齡增長呈上升趨勢,3w齡時(shí)即出現(xiàn)ABR閾值升高,其中32kHz處較為顯著,平均聽閾約60dB;8w齡時(shí)主要表現(xiàn)為8kHz和16kHz處聽閾大幅提高;8m齡時(shí)接近全聾(各頻率ABR平均聽閾為90dB左右)。ABR潛伏期檢測顯示I波

3、、III波、V波潛伏期及I-V波間期均隨年齡增長而延長,其中3w齡時(shí)即出現(xiàn)32kHz波形不清,波幅小;12w齡與8w齡相比較,4kHz及8kHz各潛伏期變化不顯著(P>0.05);8m齡時(shí)各頻率I、III、V波均無法引出。②光鏡觀察發(fā)現(xiàn),隨年齡增長,DBA/2小鼠耳蝸核、下丘和聽皮層神經(jīng)元數(shù)量減少,體積變小,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增多,尼氏小體溶解。8m齡時(shí)耳蝸核、下丘和聽皮層組織明顯疏松,細(xì)胞排列紊亂,神經(jīng)元細(xì)胞扭曲變形,胞質(zhì)胞核分界不清。③電

4、鏡觀察發(fā)現(xiàn),隨年齡增長,DBA/2小鼠耳蝸核、下丘和聽皮層神經(jīng)元細(xì)胞逐漸出現(xiàn)細(xì)胞核透亮度降低、固縮、核膜不完整、核周間隙增寬,線粒體出現(xiàn)水腫、結(jié)構(gòu)模糊,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,脂褐素大量增多,有髓神經(jīng)纖維出現(xiàn)脫髓鞘變性。④耳蝸核、下丘和聽皮層mtDNA3873bp大片段缺失率為10-4~10-5,各年齡組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各年齡組耳蝸核、下丘和聽皮層COX3基因缺失率無明顯差異(P>0.05)。⑤免疫組化結(jié)果表明,耳蝸核、下丘和