宮頸癌組織中一氧化氮合酶及CD34的表達.pdf

1、目的：宮頸癌是婦科惡性腫瘤之一,中國宮頸癌的總死亡率占婦科腫瘤的第二位,占總癌癥死亡率的第四位,因而引起廣大學者的重視.腫瘤血管形成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的基礎.有研究發(fā)現(xiàn),NO與血管形成密切相關,NO可能是腫瘤生長必要的血管形成開關,沒有NO,腫瘤的生長將會因血供的缺乏而受到限制.NO由NOS催化生成,而誘導型-氧化氮合酶(iNOS)是起主要作用的酶.微血管密度是反映腫瘤血管形成的指標之一,CD34作為血管內(nèi)皮細胞的標記物,可觀察新生內(nèi)皮細

2、胞和微血管的變化.該試驗通過檢測宮頸癌組織中iNOS及CD34的表達,研究iNOS的表達與宮頸癌血管形成的關系.1.免疫組化方法iNOS染色和CD34染色均采用免疫組織化學SP法進行.所有標本均經(jīng)10％福爾馬林固定,石蠟包埋.切取腫瘤標本4μm厚切片各4片,脫蠟至水,PBS緩沖液漂洗3分鐘;10％H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶20分鐘,清洗3次;放入EDTA抗原修復液中,加熱至99℃,維持10分鐘,作抗原修復;室溫下冷卻30分鐘,PBS液

3、漂洗3次,每次3分鐘;過氧化物酶阻斷劑孵育10分鐘,PBS漂洗3次,每次3分鐘,非免疫性動物血清孵育40分鐘.PBS漂洗3次,每次3分鐘,滴加一抗(iNOS多克隆抗體或CD34單克隆抗體),室溫下孵育60分鐘,PBS漂洗3次,每次3分鐘,加生物素標記二抗孵育10分鐘,PBS液漂洗3次,每次3分鐘,鏈霉素抗生物素-過氧化物酶溶液孵育10分鐘,PBS漂洗3次,每次3分鐘,DAB顯色,蘇木素淺染,脫水,封片,顯微鏡下觀察結果.2.數(shù)據(jù)及圖片處