人紅系終末分化中不同期幼稚細(xì)胞的分離和功能研究.pdf

1、紅血球的生成，是造血干細(xì)胞定向往紅細(xì)胞發(fā)育，成熟的過(guò)程，是一個(gè)連續(xù)而又具有階段性的過(guò)程。血型糖蛋白A的出現(xiàn)表示紅系終末分化的開(kāi)始，細(xì)胞從原成紅細(xì)胞開(kāi)始向嗜堿性幼紅細(xì)胞，嗜多色性幼紅細(xì)胞，正染色幼紅細(xì)胞增殖分化，最后細(xì)胞脫核后變成網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)成熟變成成熟紅細(xì)胞后通過(guò)骨髓進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。
　　本文建立了一個(gè)穩(wěn)定的模擬紅系體內(nèi)發(fā)育的培養(yǎng)體系，并運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞學(xué)分析法檢測(cè)了數(shù)十種紅系發(fā)育相關(guān)的膜表面蛋白，骨架

2、蛋白以及跨膜蛋白在培養(yǎng)過(guò)程中表達(dá)水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Band3在發(fā)育過(guò)程中上升的幅度最為明顯而α4integrin，一種粘附分子，先是保持高表達(dá)水平，而后降至最低。我們選取了Band3和α4 integrin這兩個(gè)變化最大的膜蛋白作為標(biāo)記物，搭配血型糖蛋白A，紅系的特異性標(biāo)記物，對(duì)我們的培養(yǎng)體系的分化過(guò)程進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，并選取了第7天和第14天的細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞分選。我們?cè)诘?天的細(xì)胞中得到了具有形態(tài)學(xué)特征的原成紅細(xì)胞，早期嗜堿性幼紅

3、細(xì)胞，晚期嗜堿性幼紅細(xì)胞和嗜多色性幼紅細(xì)胞，我們?cè)诘谑奶斓募?xì)胞中得到了具有形態(tài)學(xué)特征的嗜多色性幼紅細(xì)胞和正染色幼紅細(xì)胞，流式細(xì)胞分選得到的細(xì)胞純度達(dá)到90％以上。為了檢測(cè)這些細(xì)胞是否具有各個(gè)期該有的功能，我們對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞計(jì)數(shù)以及做生長(zhǎng)曲線(xiàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明原成紅細(xì)胞可以分裂4次，早期嗜堿性幼紅細(xì)胞可以分裂3次，晚期嗜堿性幼紅細(xì)胞可以分裂2次，嗜多色性幼紅細(xì)胞可以分裂1次，正染色幼紅細(xì)胞不能再分裂，這說(shuō)明我們流式分選得到的各個(gè)期

4、的細(xì)胞具有了紅系終末分化中個(gè)幼稚細(xì)胞的有絲分裂能力。
　　我們將這三個(gè)標(biāo)記物運(yùn)用到正常人的骨髓中，并將人骨髓進(jìn)行流式細(xì)胞分選，我們?cè)谡Ｈ牍撬柚械玫搅思兌雀哌_(dá)90％以上的各個(gè)期的細(xì)胞。我們將7個(gè)正常人骨髓的有核紅細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)在正常人的骨髓中，我們得到的成原紅細(xì)胞:早期嗜堿性幼紅細(xì)胞:晚期嗜堿性幼紅細(xì)胞:嗜多色性幼紅細(xì)胞:正染色幼紅細(xì)胞的比例達(dá)到了預(yù)測(cè)了1∶2∶4∶8∶16。而當(dāng)我們運(yùn)用這三個(gè)標(biāo)記物到骨髓異常增生綜合癥的

5、病人身上時(shí)，發(fā)現(xiàn)他們骨髓中紅系發(fā)育終末階段的情況發(fā)生了變化。我們?cè)诒狙芯恐邪l(fā)現(xiàn)了建立了穩(wěn)定的紅系體外誘導(dǎo)培養(yǎng)體系，并且發(fā)現(xiàn)了紅系發(fā)育的獨(dú)特標(biāo)記物。該標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)能讓我們能夠得到大量的不同期的紅系終末發(fā)育的有核紅細(xì)胞，以便于讓我們更深層次的對(duì)紅細(xì)胞的分化和發(fā)育進(jìn)行研究，也讓我們可以將不同期的有核紅細(xì)胞進(jìn)行RNA測(cè)序，DNA測(cè)序等方面的分子生物學(xué)研究。紅系特異性標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)也能讓我們將其投入臨床應(yīng)用中，幫助診斷時(shí)期專(zhuān)一性的血液疾病以及跟紅系