黃芩苷對小鼠CMV急性期感染性炎癥介導(dǎo)的組織病理損傷的保護(hù)作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　建立小鼠巨細(xì)胞病毒（MCMV）全身播散性感染模型，在整體水平觀察黃芩苷對模型鼠感染急性期炎性損傷的保護(hù)作用，并初步探討其機制。
　　方法：
　　1、MCMV全身播散性感染動物模型的建立及標(biāo)本的收集：隨機將90只4.5周齡8～10g BALB/c幼年雌性小鼠分成3組，分別為正常對照組（M組）、安慰劑對照組（V組）、黃芩苷治療組（B組）。第一天給各組小鼠分別腹腔注射培養(yǎng)液DMEM/H（M組）和MCMV Smit

2、h（V和B組）。黃芩苷治療組于接種MCMV24h后開始予以黃芩苷0.06mg/g（0.2ml）治療；V組和B組則給予等量DMEM/H。每日一次，連續(xù)28d。分別于治療后第2d、4d、7d、14d和28d各組隨機處死6只小鼠，無菌取唾液腺、脾、肝、肺、腎、心及外周血標(biāo)本進(jìn)行檢測。
　　2、各臟器病理損傷程度：對各臟器組織進(jìn)行石蠟切片和HE染色，采用相對應(yīng)的半定量標(biāo)準(zhǔn)評估病理損傷程度。
　　3、血清IL-1β和IL-18水平：采

3、用雙抗體夾心ELISA法檢測小鼠感染后2d、4d、7d、14d和28d血清中促炎性細(xì)胞因子IL-1β和IL-18濃度。
　　4、各組織中caspase-1表達(dá)：用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測組織中caspase-1表達(dá)，并進(jìn)行半定量分析。
　　結(jié)果：
　　1、組織病理炎癥改變：感染后2d，安慰劑對照組和黃芩苷治療組各組織臟器已出現(xiàn)明顯炎癥改變，各臟器組織在感染7d時最重，之后緩慢減輕，除外腎臟在感染后14d炎癥反應(yīng)最重。黃芩苷

4、治療組炎癥改變程度相對于安慰劑組明顯減輕，但在炎癥持續(xù)時間上沒有明顯改變。安慰劑對照組小鼠臟器主要病變特點：①脾臟：次級淋巴濾泡增生，白髓病理性增生，炎性細(xì)胞浸潤，嚴(yán)重時紅髓和白髓結(jié)構(gòu)破壞，組織壞死；②心?。盒募〖?xì)胞水腫，心肌間質(zhì)內(nèi)少量炎性細(xì)胞浸潤，嚴(yán)重可見溶解壞死，心肌細(xì)胞核內(nèi)可見病毒包涵體；③肺：肺泡間隔增寬，內(nèi)可見出血，水腫，間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤，終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞核內(nèi)可見病毒包涵體，毛細(xì)血管充血；④肝：肝細(xì)胞氣球樣變，點灶狀壞死，

5、門管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤，嚴(yán)重時肝細(xì)胞核內(nèi)可見病毒包涵體；⑤腎：腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤，腎小球內(nèi)細(xì)胞增多，腫脹，bowman’s囊變窄，嚴(yán)重時可見腎小管上皮細(xì)胞壞死及其核內(nèi)出現(xiàn)病毒包涵體；⑥唾液腺：出現(xiàn)炎性浸潤灶，嚴(yán)重時出現(xiàn)結(jié)構(gòu)破壞。但在感染后4～14天，黃芩苷治療組各組織病理評分明顯低于安慰劑對照組（p<0.05）。
　　2、血清炎癥因子水平：①IL-1β：正常對照組小鼠血清IL-1β表達(dá)基本維持在穩(wěn)定水平。與正常對照組相比，MCMV感染

6、后2d，安慰劑對照組和黃芩苷治療組IL-1β表達(dá)都開始升高，一直到28d都處在上升趨勢，各時間點與正常對照組相比都有顯著差異（p<0.01），但在14d后，黃芩苷治療組與安慰劑對照組比較升高明顯減慢（p<0.05）。②IL-18：正常對照組小鼠血清IL-18表達(dá)水平也維持在一定水平；與正常對照組相比，安慰劑對照組和黃芩苷治療組IL-18表達(dá)在MCMV感染后2d開始逐漸升高，直到28d，各時間點與正常對照組相比都有顯著差異（p<0.01）

7、，但在感染7d后，黃芩苷治療組與安慰劑對照組比較升高明顯減慢（p<0.01）。
　　3、組織中caspase-1表達(dá)：在感染后7d，安慰劑對照組（V組）和黃芩苷治療組（B組）脾臟、心臟、肺臟、肝臟、腎臟和唾液腺組織中caspase-1的表達(dá)水平明顯高于M組（p<0.05），且V組明顯高于B組（p<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　黃芩苷對小鼠MCMV感染急性期的病理損傷有改善作用，這種作用可能是黃芩苷通過