丹參酮ⅡA防治腎性高血壓大鼠心肌纖維化的作用及其對膠原代謝的影響.pdf

1、高血壓心臟病的病理基礎(chǔ)不僅表現(xiàn)在心臟重量的增加，更重要的是心臟結(jié)構(gòu)的改變，越來越多的研究資料表明，除了心肌肥大，心肌纖維化也是高血壓心臟病心肌重塑的主要病理特征之一。大量的基礎(chǔ)和臨床資料證實，高血壓進程中會出現(xiàn)心肌僵硬度增加，進而限制心肌活動、降低心室的順應性、影響心肌的收縮及舒張功能以及引發(fā)心律失常，是引起心力衰竭的重要原因，因此研究與開發(fā)防治心肌纖維化的藥物是當今藥理學研究領(lǐng)域的重要課題之一。心肌纖維化是以心肌細胞和間質(zhì)膠原數(shù)量、質(zhì)

2、量發(fā)生改變?yōu)樘卣鞯男呐K重構(gòu)。心肌膠原代謝受多種因素調(diào)控，其中體液因素涉及腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)(RAAS)、內(nèi)皮素(ET)、兒茶酚胺、緩激肽、生長因子、一氧化氮、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)、金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMPs)及細胞內(nèi)鈣等。除了RAAS抑制藥物血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、AT1受體拮抗劑、鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑和內(nèi)皮素受體拮抗劑外，Na+-H+交換抑制劑阿米洛利(Amiloride)、ICAM-1中和抗體、N—酰基—絲氨酸

3、—天門冬氨酸—賴氨酸(Ac-SDKP)、他汀類藥物、抗細胞因子抗體(TNF-α,IFN-γ，TGF-β)、MMP抑制劑、吡非尼酮(pirfenidone,PFD)、PPARα和PPARγ激動劑和丹參等中藥抗心肌纖維化的作用也受到國內(nèi)外學者的關(guān)注。 實驗目的本實驗將利用兩腎兩夾(two-kidneytwo-clip,2K2C)腎性高血壓模型研究丹參酮ⅡA(TanshinoneⅡA，以下簡稱Tsn)防治心肌纖維化的作用，并通過檢測膠

4、原基因表達、蛋白含量、心肌MMPs/TIMPsmRNA水平的變化，探討Tsn對高血壓大鼠心肌膠原代謝的調(diào)節(jié)作用。 實驗方法制作兩腎兩夾腎性高血壓大鼠模型，Tsn70mg·kg-1·d-1(高劑量)和35mg·kg-1·d-1(低劑量)、纈沙坦(Valsartan)26.7mg·kg-1·d-1連續(xù)灌胃給藥6周，無創(chuàng)法測量大鼠尾動脈收縮壓；超聲心動圖和頸動脈插管檢測心臟左室收縮舒張功能、結(jié)構(gòu)改變和左室血流動力學變化；堿水解法測定心

5、肌組織羥脯氨酸含量；應用VG染色和計算機圖像分析技術(shù)檢測心肌間質(zhì)膠原容積分數(shù)(collagenvolumefraction,CVF)和心肌血管周圍膠原容積分數(shù)(perivascularcircumferentialarea,PVCA)；WesternBlot檢測心肌組織Ⅰ型膠原(collagentypeⅠ,CollagenⅠ)蛋白表達；RT-PCR檢測心肌組織CollagenⅠ、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA

6、水平。 實驗結(jié)果1.Tsn對高血壓大鼠血壓、左心肥大和心功能的影響給藥6周后，Tsn組血壓有下降趨勢，但無明顯差別，纈沙坦組具有明顯的降壓作用。Tsn高劑量組和纈沙坦組的左心相對重量比值與模型組相比，分別降低了23.5％和26.5％；Tsn高劑量組的舒張末室間隔厚度(end-systolicinterventricularseptalthickness,IVSd)和舒張末左室后壁厚度(leftventricularposteri

7、orwallthicknessatend-diastole,Pwd)相對模型組分別下降了33.8％和24.3％，纈沙坦組分別下降了33.5％和28.1％。說明Tsn抑制心肌肥大，效果近似于纈沙坦。模型對照組的左室縮短分數(shù)(LVfractionalshortening,LVFS)明顯低于假手術(shù)組，Tsn高劑量組和低劑量組相對模型對照組有增加趨勢，但無統(tǒng)計學意義，纈沙坦組相對模型對照組增加了14.26％；Tsn高劑量組和纈沙坦組的左室收縮壓

8、(leftventricularsystolicpressure,LVSP)值較模型組增加31.4％和42.1％，左室壓最大下降速率(maxiumrateoffallofleftventricularpressure，-dP/dtmax)較模型組增加48.8％和46.6％，左室舒張末期壓(leftventricularenddiastolicpressure，LVEDP)值降低38.0％和43.0％；說明Tsn明顯改善心肌舒張功能，作用

9、接近纈沙坦。 2.Tsn對高血壓大鼠心肌纖維化的影響VG染色圖形顯示，Tsn高劑量組和纈沙坦組的纖維化面積比2K2C模型組顯著減少；計算機圖像分析結(jié)果表明，Tsn高劑量組和低劑量組的CVF明顯低于兩腎兩夾模型組，分別下降了19.7％和7.9％；Tsn高劑量組的PVCA明顯低于兩腎兩夾模型組，下降了10.7％；纈沙坦組的CVF和PVCA較模型對照組降低了26.8％和12.8％。Tsn高劑量組、低劑量組和纈沙坦組的膠原含量明顯低于兩

10、腎兩夾模型組，分別下降了25.2％、14.1％和23.4％。提示Tsn抑制心肌纖維化和膠原沉積，效果和纈沙坦相似。 3.Tsn對高血壓大鼠心?、裥湍z原(CollagenⅠ)含量的影響Tsn高劑量組、低劑量組和纈沙坦組CollagenⅠ蛋白含量明顯低于兩腎兩夾模型組，分別下降了59.3％、24.6％和63.2％，這與心肌膠原含量檢測結(jié)果一致，都提示Tsn和纈沙坦均能抑制心肌間質(zhì)膠原沉積。Tsn高劑量組、低劑量組、纈沙坦組和兩腎兩夾

11、模型組之間的CollagenImRNA水平無明顯差別，這提示Tsn和纈沙坦對CollagenImRNA水平無下調(diào)作用，二者并不是通過CollagenⅠ基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控以改變膠原含量.而是與轉(zhuǎn)錄后和/或翻譯后調(diào)控有關(guān)。 4.Tsn對高血壓大鼠心肌MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA水平的影響Tsn和纈沙坦均能下調(diào)TIMP-1mRNA的水平；但Tsn組MMP-2mRNA的水平相對模型組無明顯改變，MMP-9和TIM

12、P-2mRNA的水平下調(diào)，而纈沙坦組MMP-9和TIMP-2mRNA的水平相對模型組無明顯改變，MMP-2mRNA水平下降，Tsn組MMP-2/TIMP-2mRNA水平的比值比纈沙坦組明顯升高。 實驗小結(jié)1.Tsn在無明顯降血壓劑量下抑制兩腎兩夾高血壓大鼠的心肌肥大，效果和ATl受體阻斷劑纈沙坦相當。Tsn對心肌收縮功能的影響沒有纈沙坦明顯，但對心肌舒張功能的改善效果和纈沙坦相當。 2.Tsn和纈沙坦均能顯著減少兩腎兩夾

13、高血壓大鼠左室心肌纖維化面積，明顯降低心肌CVF和PVCA，并且抑制心肌膠原沉積。 3.Tsn對兩腎兩夾高血壓大鼠左室心肌CollagenImRNA水平無下調(diào)作用，但抑制心肌CollagenⅠ蛋白表達，提示Tsn并不是通過CollagenⅠ基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控以改變膠原含量，而是與轉(zhuǎn)錄后和/或翻譯后調(diào)控有關(guān)。 4.Tsn下調(diào)兩腎兩夾高血壓大鼠左室心肌MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA的水平，MMP-2/TIMP-2m