牛磺鵝去氧膽酸對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)理研究.pdf

1、?；蛆Z去氧膽酸(Tauroehenodeoxycholie Acid，TCDCA)是動物膽汁的主要有效成分之一，其化學(xué)名稱為3α，7α-二羥基-5β-24-膽烷酰-N-?；撬?，是由?；撬?Taurine，Tau)和鵝去氧膽酸(Chenodeoxycholic acid，CDCA)相結(jié)合而成的酸性化合物。本課題系統(tǒng)的開展了TCDCA的免疫調(diào)節(jié)作用研究工作，旨在探討TCDCA對正常和免疫功能低下小鼠機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)理。其主要內(nèi)容包括

2、： (1)采用雞紅細(xì)胞半體內(nèi)法、ELISA方法和實時熒光定量PCR技術(shù)分別檢測了TCDCA對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能、外周血中IL-1β和IgG含量、脾臟IL-2基因的表達(dá)的影響。實驗結(jié)果顯示：TCDCA按0.1g/kg·b·w口服給藥，能夠極顯著提高小鼠腹腔巨噬吞噬功能，且達(dá)到最大作用強度；能夠顯著提高外周血中IL-1β和IgG含量：能夠提高脾臟IL-2的表達(dá)量；而TCDCA分別按0.153g/kg·b·w和0.189g/k

3、g·b·w給藥，則均能顯著抑制小鼠腹腔巨噬吞噬功能；降低脾臟IL-2的表達(dá)量；當(dāng)TCDCA劑量達(dá)0.189g/kg·b·w時，還能顯著抑制外周血中IgG含量。因而表明，TCDCA的正常機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用與其劑量有密切關(guān)系，即劑量在0.043～0.1g/kg·b·w范圍內(nèi)，對機(jī)體特異性和非特異性免疫功能呈增強作用，劑量為0.1g/kg·b·w的作用最強，當(dāng)劑量大于0.1g/kg·b·w時，免疫作用開始減弱，甚至產(chǎn)生抑制作用。 (2

4、)采用MTT法、吞噬中性紅法、ELISA方法分別檢測了TCDCA及其代謝產(chǎn)物CDCA和Tau對體外培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)、細(xì)胞因子分泌等免疫功能的影響。實驗結(jié)果顯示： ①終濃度為0.1、1和10μg/ml的TCDCA對正常腹腔巨噬細(xì)胞增殖反應(yīng)具有顯著的增強作用；終濃度為0.01、1和10μg/ml的TCDCA對LPS誘導(dǎo)增殖反應(yīng)有顯著的協(xié)同作用。終濃度為0.01、0.05、1μg/ml的TCDCA對腹腔巨噬

5、細(xì)胞分泌IL-1β具有顯著的增強作用；終濃度為0.01μg/ml的TCDCA對LPS誘導(dǎo)的腹腔巨噬細(xì)胞分泌IL-1β有顯著的協(xié)同作用；終濃度為1μg/ml的TCDCA對LPS刺激的腹腔巨噬細(xì)胞分泌IL-1β具有顯著的抑制作用。TCDCA對正常腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能無顯著作用。 ②終濃度為0.1和1μg/ml的TCDCA對脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)具有顯著的增強作用：終濃度為0.1μg/ml的TCDCA對ConA刺激的增殖反應(yīng)有顯著的拮抗作

6、用；TCDCA對LPS和CsA刺激的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)均無顯著作用。終濃度為0.01μg/ml的TCDCA對脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2具有顯著的增強作用；TCDCA對ConA刺激的脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2則無顯著作用；終濃度為0.01μg/ml的TCDCA對LPS誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2有顯著的協(xié)同作用；終濃度為0.05μg/ml的TCDCA對LPS誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2具有顯著的拮抗作用；終濃度為0.01μg/ml的TCDCA對C

7、sA抑制的脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的協(xié)同抑制作用達(dá)顯著水平。終濃度為0.01和0.05μg/ml的TCDCA對脾淋巴細(xì)胞分泌IgG具有顯著的增強作用；終濃度為0.05和0.1μg/ml的TCDCA對LPS誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞分泌IgG有顯著的協(xié)同作用。③終濃度為0.5和5μg/ml的CDCA和Tau對正常和亞適量LPS刺激的腹腔巨噬細(xì)胞、脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)及脾淋巴細(xì)胞分泌IgG均無顯著作用。終濃度為0.5和5μg/ml的CDCA和Tau對正

8、常腹腔巨噬細(xì)胞分泌IL-1β均有顯著的增強作用。終濃度為5μg/ml的CDCA對腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能具有顯著的增強作用：終濃度為5μg/ml的Tau對腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能具有顯著的抑制作用。終濃度為0.5μg/ml的CDCA對正常脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2具有顯著的增強作用；終濃度為0.5和5μg/ml的Tau無論是對正常還是ConA、LPS刺激的脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2具有顯著的或者極顯著的增強作用；終濃度為0.5μg/ml的Tau對C

9、sA抑制的IL-2分泌具有顯著的恢復(fù)作用。 (3)評價了TCDCA分別對CTX和CsA制備了非特異性和特異性免疫功能低下小鼠模型的作用。結(jié)果顯示：TCDCA按0.1g/kg·b·w口服給藥，對非特異性免疫功能低下小鼠模型腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能和特異性免疫低下小鼠模型外周血中的IgG均具有顯著的增強或恢復(fù)作用。 (4)分析了TCDCA的體內(nèi)代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，預(yù)測該藥對神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的影響，并采用放射免疫方法檢測了給

10、藥后小鼠血清中皮質(zhì)醇的含量。結(jié)果顯示：TCDCA按0.1g/kg·b·w口服給藥，對小鼠神經(jīng)．體液．免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)中皮質(zhì)醇的含量具有極顯著的增強作用。 本試驗研究的主要結(jié)論如下： (1)TCDCA增強小鼠免疫功能的最適給藥劑量為0.1g/kg。 (2) TCDCA無論對小鼠機(jī)體非特異性免疫功能還是特異性細(xì)胞免疫、體液免疫功能均呈現(xiàn)出顯著的劑量依賴性的雙向免疫調(diào)節(jié)作用。 (3)TFCDCA無論是對正常小鼠機(jī)體