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文檔簡介
1、目的:
不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris)是冠心病的急性事件,屬于急性冠脈綜合征(acs),是介于慢性穩(wěn)定性心絞痛和急性心肌梗死之間的臨床綜合征。冠心病不穩(wěn)定型心絞痛主要包括(1)初發(fā)勞力型心絞痛2)惡化勞力型心絞痛(3)靜息心絞痛(4)梗死后心絞痛(5)變異型心絞痛;不穩(wěn)定性心絞痛病理基礎(chǔ)是由于冠狀動脈粥樣斑塊破裂出血繼而血小板粘附聚集引起,特點是心絞痛癥狀呈進(jìn)行性加重,如果不能給予及時治療或
2、者及時干預(yù)亦,可進(jìn)展為急性心肌梗死;不穩(wěn)定型心絞痛與穩(wěn)定性心絞痛相比,不穩(wěn)定型心絞痛患者活動耐力明顯減低,疼痛更加劇烈,持續(xù)的時間更長,部分患者數(shù)月后進(jìn)展為急性心肌梗死。
GDF-15(生長分化因子-15),既往的研究指出GDF-15與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[1617];近年來的研究則發(fā)現(xiàn) GDF-15與心不穩(wěn)定型心絞痛密切相關(guān),在不穩(wěn)定型心絞痛進(jìn)展過程中起著保護(hù)性作用。GDF-15有明顯特異性,高表達(dá)在胎盤組織和前列腺組織,在心
3、臟及其他組織中不表達(dá)或者低表達(dá),但心肌細(xì)胞在出現(xiàn)缺血或者缺血/再灌注損傷情況時,GDF-15表達(dá)會顯著升高[23,24]。
既往研究表明人類GDF-15基因中有數(shù)十個SNP(單核苷酸多態(tài)性)位點,大多數(shù)為無意義 SNP,其中有3個位于外顯子中的SNP:+157A/T(rs1059369)、-3148C/G(rs1059519)、+2438C/G(rs1058587)導(dǎo)致了GDF-15前體蛋白的氨基酸序列的改變,從而有可能改變G
4、DF-15的蛋白活性和穩(wěn)定性[56],我們由此來著手來探討 GDF-15位點+157A/T的SNP:rs1059369多態(tài)性是否與不穩(wěn)定型心絞痛具有相關(guān)性。
1.通過對比全部90例冠狀動脈造影受檢者的GDF-15的血漿水平來分析GDF-15水平與不穩(wěn)定型心絞痛的關(guān)系;
2.并且提取全基因組DNA,采用PCR-LDR(連接酶檢測反應(yīng)法)來對全基因組DNA基因多態(tài)位點+157A/T的SNP:rs1059369進(jìn)行分型檢測
5、;分別對冠狀動脈造影陽性組50例患者及對照組冠狀動脈造影陰性40例病人的SNP:rs1059369分型檢測結(jié)果進(jìn)行兩組間不同表型和兩組間各表型比較,從而來分析GDF-15基因多態(tài)位點+157A/T與不穩(wěn)定型心絞痛相關(guān)性。
方法:
1.冠狀動脈造影陽性50例,對照組冠狀動脈造影陰40例。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫(ELlSA)方法測定全部患者的GDF-15血清水平,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
2.采用PCR-LDR(連接
6、酶檢測反應(yīng)法)對全部病人進(jìn)行單核苷酸多態(tài)(SNP)分型檢測分析。設(shè)計特異上游引物和下游引物,多重PRC擴增SNP,來獲得含有突變的目的基因片段,在目的基因片段設(shè)定熒光探針,當(dāng)探針與目的基因片段DNA互補配對后,通過連接酶催化磷酸二酯鍵將相鄰兩根探針連接從而形成產(chǎn)物,當(dāng)探針的兩條寡聚核苷酸接頭處存在堿基錯配,則連接反應(yīng)便不能進(jìn)行。最后,上測序儀讀取測序結(jié)果,然后,進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
結(jié)果:
1冠狀脈動造影陽性組與對照組的
7、一般特征
冠狀動脈造影陽性組與對照組組間比較,患者年齡、性別、吸煙、高血壓、血糖、血脂水平均無統(tǒng)計學(xué)差異。冠狀動脈造影陽性組男性多于女性,而經(jīng)冠脈造影證實冠脈正常,有胸痛癥狀的對照組女性多于男性,符合冠心病男性發(fā)病率高及心臟神經(jīng)官能癥女性發(fā)病率高的流行病學(xué)特點。(表一)
2冠狀脈動造影陽性組與對照組GDF-15血清水平
冠狀脈動造影陽性組與冠狀動脈造影陰性組血清中GDF-15水平測定實驗得出:冠狀脈動造影陽
8、性組50例患者外周血GDF-15水平為:1610.08±312.80,冠狀動脈陰性組40例患者外周血 GDF-15水平為:630.73±132.57。陽性組GDF-15血清水平高;對照組血清水平低;差異有統(tǒng)計學(xué)意義(表二)
3GDF-15基因多態(tài)位點+157A/Trs1059369多態(tài)性分型
GDF-15基因多態(tài)位點+157A/Trs1059369多態(tài)性分型為[A/T]:AT、TT、AA、OO,產(chǎn)物大小50/A,54
9、/T。其中冠狀動脈造影陽性組分型:AT型20人 TT型7人 AA型19人OO型4人冠狀動脈造影陰性組分型:AT型18人TT型8人 AA型13人 OO型1人
4冠狀脈動造影陽性組與冠狀動脈造影陰性組兩組間不同表型分析
冠狀動脈造影陽性者與冠狀動脈造影陰性者血清+157A/T:rs1059369[A/T]多態(tài)分型兩組間不同表型的比較(p=0.57,表三)無明顯統(tǒng)計學(xué)意義
5冠狀脈動造影陽性組與對照組兩組間各表型
10、分析
冠狀動脈造影陽性者與冠狀動脈造影陰性者血清+157A/T:rs1059369[A/T]多態(tài)分型兩組間各表型分析(AT組p=0.63 TT組P=0.45 AA組P=0.5900組P=0.26。表四)無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)論:
1.冠狀動脈造影陽性者外周血中GDF-15血漿水平明顯高于冠狀動脈造影陰性組血漿水平(P<0.01),冠狀動脈造影陽性者GDF-15血清水平高;冠狀動脈造影陰性者血清水平低;差異有
11、統(tǒng)計學(xué)意義(表二).
2.GDF-15基因多態(tài)位點+157A/T:rs1059369的多態(tài)性與不穩(wěn)定型心絞痛無明顯相關(guān)性:rs1059369的多態(tài)性沒有影響GDF-15生物學(xué)活性,可能不能改變GDF-15的蛋白活性和穩(wěn)定性,rs1059369多態(tài)性不能直接或者間接影響GDF-15在不穩(wěn)定型心絞痛患者血漿中的表達(dá)水平,rs1059369多態(tài)性[A/T]分布在冠狀動脈造影陽性者與冠狀動脈造影陰性者中無明顯差異(陽性組:AT型20人
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