三組復(fù)方藥物防治去卵巢后大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)觀察及其機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　建立去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型，采用復(fù)方腦復(fù)康、復(fù)方阿司匹林和前兩者組成的四藥復(fù)方對該骨質(zhì)疏松模型進(jìn)行干預(yù)，觀察三組復(fù)方藥物對骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用并將其與雌激素替代療法進(jìn)行比較，探討三組復(fù)方藥物預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制及優(yōu)越性。
　　方法:
　　4月齡SPF級雌性未交配SD大鼠54只，體重（254±20）g，隨機(jī)分為7組，除基礎(chǔ)組6只外，其余每組8只?；A(chǔ)組(BAS):不給藥，實(shí)驗(yàn)開始即處死取材;假手術(shù)組(SHAM

2、)行假手術(shù)，給予溶劑對照;其他組均行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，去卵巢組(OVX)給予溶劑對照;己烯雌酚組(D30)給予己烯雌酚30μg/kg/d;復(fù)方腦復(fù)康組(OVX+P-S)給予復(fù)方腦復(fù)康（康力龍2.15mg/kg/d+腦復(fù)康0.864g/kg/d）;復(fù)方阿司匹林組(OVX+A-D10)給予復(fù)方阿司匹林(阿司匹林9mg/kg/d+己烯雌酚10μg/kg/d);四藥復(fù)方組給予(OVX+A-D10+P-S)給予復(fù)方阿司匹林（阿司匹林9mg/kg/d

3、+己烯雌酚10μg/kg/d）和復(fù)方腦復(fù)康（康力龍2.15mg/kg/d+腦復(fù)康0.864g/kg/d）。所有藥物按5ml/kg灌胃給藥，每天一次，連續(xù)90d。所有動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第14d、13d各行頸部皮下注射四環(huán)素(35mg/kg)，作為第1次熒光標(biāo)記，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第4d、3d各行頸部皮下注射鈣黃綠素(10mg/kg)作為第2次熒光標(biāo)記，以在骨表面形成綠色雙熒光標(biāo)志，兩次熒光標(biāo)記間隔時間為10d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，心臟取血處死大鼠，取血清及

4、大腦勻漿作生化指標(biāo)檢測;取左側(cè)脛骨和第4腰椎進(jìn)行骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)測量;取左股骨和第5腰椎進(jìn)行骨密度和生物力學(xué)參數(shù)測量;取左股骨測定羥脯氨酸含量;取子宮行石蠟包埋，HE染色后進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析觀察和子宮內(nèi)膜厚度測量;取主要臟器測定器官指數(shù)。
　　結(jié)果:
　　1.去卵巢后大鼠發(fā)生典型骨質(zhì)疏松的變化:
　　去卵巢后大鼠與假手術(shù)大鼠比較，具有以下特點(diǎn):
　　(1)脛骨上段松質(zhì)骨的骨丟失明顯，表現(xiàn)為骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(％Tb

5、.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)均較假手術(shù)對照組顯著降低(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)，骨小梁分離度(Tb.Sp)顯著增加（P＜0.05）;熒光周長百分?jǐn)?shù)(％L.Pm)和骨形成率(BFR/TV)也呈顯著增加(P＜0.05，P＜0.05)。破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著升高(P＜0.01，P＜0.01)。
　　(2)腰椎松質(zhì)骨的骨丟失明顯，表現(xiàn)為骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(％Tb.Ar)、骨小梁厚度(T

6、b.Th)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)均呈現(xiàn)較假手術(shù)對照組顯著降低(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01)，骨小梁分離度(Tb.Sp)顯著增加(P＜0.01);動態(tài)參數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(3)脛骨中段皮質(zhì)骨靜態(tài)和動態(tài)參數(shù)較假手術(shù)對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(4)全股骨骨密度、生物力學(xué)參數(shù)彈性載荷和彎曲能量均較假手術(shù)對照組明顯降低(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05);而腰椎骨密度和生物力學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異。

7、　　(5)腦勻漿生化指標(biāo)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)顯著降低(P＜0.05);血清總膽固醇顯著增高(P＜0.05)，血鈣顯著降低（P＜0.05）;骨消化液羥脯氨酸含量(Hyp)無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(6)去卵巢使體重明顯增加(P＜0.05)，肝指數(shù)、脾指數(shù)、腎上腺指數(shù)、腦指數(shù)和腎指數(shù)均顯著降低(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。
　　(7)去卵巢使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度明顯降低(P＜

8、0.01，P＜0.01)。
　　2.己烯雌酚(D30)對去卵巢大鼠的影響
　　去卵巢后大鼠補(bǔ)充己烯雌酚，與去卵巢大鼠組比較，具有以下特點(diǎn):
　　(1)己烯雌酚能有效預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
　?、倜劰巧隙嗡少|(zhì)骨的％Tb.Ar、Tb.N均較去卵巢組顯著增加（P＜0.01，P＜0.01），Tb.Sp則顯著降低(P＜0.01);而％L.Pm顯著降低(P＜0.05)，其余動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分

9、數(shù)均顯著降低(P＜0.01，P＜0.01)。
　?、谘邓少|(zhì)骨的％Tb.Ar、Tb.N均較去卵巢組顯著增加(P＜0.05，P＜0.05)，Tb.Sp則顯著降低(P＜0.05);而％L.Pm顯著降低(P＜0.05)，其余動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。
　?、勖劰侵卸纹べ|(zhì)骨靜態(tài)參數(shù)改變無統(tǒng)計學(xué)差異;骨外膜骨形成率(P-MAR)顯著降低(P＜0.05)。
　?、芄晒枪敲芏?、股骨生物力學(xué)參數(shù)彈性載荷和彎曲能力均顯著增加(P＜0.05，

10、P＜0.05，P＜0.05)。腰椎骨密度和生物力學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　?、莨窍篐yp明顯增加(P＜0.05);腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX也顯著增高(P＜0.01);血鈣、血磷均有顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)，血清堿性磷酸酶(ALP)顯著降低(P＜0.05)。
　　(2)己烯雌酚可使去卵巢大鼠體重顯著降低(P＜0.05);腦、肝臟、脾臟、腎上腺和腎臟指數(shù)均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01，P

11、＜0.01，P＜0.01）。
　　(3)己烯雌酚可使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P＜0.01，P＜0.01)。
　　(4)己烯雌酚可有效降低去卵巢大鼠血脂膽固醇，升高甘油三酯水平。己烯雌酚使去卵巢后大鼠血清總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)均顯著降低(P＜0.01、P＜0.05)，而TG顯著增高(P＜0.05)。
　　3.復(fù)方腦復(fù)康(P-S)對去卵巢大鼠的影響:
　　去卵巢后大鼠補(bǔ)充復(fù)方腦復(fù)康

12、，與去卵巢大鼠組及己烯雌酚組相比較，具有以下特點(diǎn):
　　(1)復(fù)方腦復(fù)康能有效預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
　?、倥c去卵巢組比較，復(fù)方腦復(fù)康組脛骨上段松質(zhì)骨的％Tb.Ar、Tb.Th和Tb.N均顯著增加(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05);動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異;破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著降低（P＜0.01，P＜0.01）。與己烯雌酚組相比，復(fù)方腦復(fù)康組Tb.Th顯著增加(P＜0.05)，動態(tài)指標(biāo)和骨吸收指標(biāo)無統(tǒng)

13、計學(xué)差異。
　?、谂c去卵巢組比較，復(fù)方腦復(fù)康組腰椎松質(zhì)骨動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;與己烯雌酚組相比，復(fù)方腦復(fù)康組Tb.N顯著降低(P＜0.05)，Tb.Sp顯著增加(P＜0.05)。
　?、叟c去卵巢組比較，復(fù)方腦復(fù)康組脛骨中段骨內(nèi)膜熒光標(biāo)記周長百分?jǐn)?shù)(％E-L.Pm)顯著降低(P＜0.01)，其余動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　?、芘c去卵巢組比較，復(fù)方腦復(fù)康組腰椎骨密度、股骨骨密度、股骨斷裂載荷和彈性載荷均顯著增加(P＜

14、0.05，P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05);與己烯雌酚組相比，復(fù)方腦復(fù)康組斷裂載荷、彈性載荷和彎曲能量均顯著增加(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)。
　　(2)與去卵巢組比較，復(fù)方腦復(fù)康組腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX顯著增高(P＜0.01)，血鈣和血磷顯著增加(P＜0.05，P＜0.05)，TG和HDL-C顯著降低(P＜0.01、P＜0.05);與己烯雌酚組相比，復(fù)方腦復(fù)康組超氧化物歧化酶(SOD)顯著增加(P＜

15、0.05)，血清TC、LDL-C和HDL-C顯著增加(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.05)，血鈣顯著降低(P＜0.05)。
　　(3)與去卵巢組比較，復(fù)方腦復(fù)康組對體重影響不顯著，肝臟指數(shù)顯著增加(P＜0.05);與己烯雌酚組相比，復(fù)方腦復(fù)康組腦、肝臟、脾臟和腎上腺指數(shù)顯著減少(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。
　　(4)與去卵巢組比較，復(fù)方腦復(fù)康使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P＜0.01

16、，P＜0.01)。與己烯雌酚組相比，復(fù)方腦復(fù)康組子宮指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度顯著降低（P＜0.01，P＜0.05）。
　　4.復(fù)方阿司匹林(A-D10)對去卵巢大鼠的影響:
　　去卵巢后大鼠補(bǔ)充復(fù)方阿司匹林，與去卵巢大鼠組及己烯雌酚組相比較，具有以下特點(diǎn):
　　(1)復(fù)方阿司匹林能有效預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
　?、倥c去卵巢組比較，復(fù)方阿司匹林組脛骨上段松質(zhì)骨的％Tb.Ar和Tb.N均顯著增加(P＜0.01，P＜

17、0.01)，Tb.Sp顯著減少(P＜0.01);動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異;破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著降低(P＜0.01，P＜0.01)。與己烯雌酚組相比，復(fù)方阿司匹林組靜態(tài)指標(biāo)和骨吸收指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　②與去卵巢組比較，復(fù)方阿司匹林組腰椎松質(zhì)骨靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;動態(tài)指標(biāo)％L.Pm、BFR/BS和BFR/TV顯著增加(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05);與己烯雌酚組相比，復(fù)方阿司匹林組％L.Pm、BFR/BS、B

18、FR/BV和BFR/TV顯著增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05)。
　?、叟c去卵巢組比較，復(fù)方阿司匹林組脛骨中段骨內(nèi)膜熒光標(biāo)記周長百分?jǐn)?shù)(％E-L.Pm)顯著降低(P＜0.05)，其余動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　?、軓?fù)方阿司匹林可使去卵巢大鼠股骨骨密度顯著增加(P＜0.05);復(fù)方阿司匹林組與去卵巢組比較或者與己烯雌酚組相比，生物力學(xué)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(2)與去卵巢組比較，復(fù)方阿司匹

19、林組腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX顯著增高(P＜0.01)，單胺氧化酶(MAO)顯著降低(P＜0.01);血清TC、TG和LDL-C顯著降低(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01);與己烯雌酚組相比，復(fù)方阿司匹林組TG、LDL-C、Ca和P顯著降低(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)，ALP顯著升高(P＜0.05)。
　　(3)與去卵巢組比較，復(fù)方阿司匹林組體重顯著降低(P＜0.05)，腦、肝臟、脾臟、腎上腺

20、和腎臟指數(shù)顯著增加(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01);與己烯雌酚組相比，復(fù)方阿司匹林組肝臟和腎上腺指數(shù)顯著減少(P＜0.05，P＜0.05)。
　　(4)與去卵巢組比較，復(fù)方阿司匹林組使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)。與己烯雌酚組相比，復(fù)方阿司匹林組子宮指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　5.四藥復(fù)方(P-S+A-D10)對去卵巢大鼠的影響:
　　去

21、卵巢后大鼠補(bǔ)充四藥復(fù)方，與去卵巢大鼠組及己烯雌酚組相比較，具有以下特點(diǎn):
　　(1)四藥復(fù)方能部分預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
　?、倥c去卵巢組比較，四藥復(fù)方組脛骨上段松質(zhì)骨的Tb.Th和Tb.N均顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)，％L.Pm顯著增加(P＜0.05)，破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著降低(P＜0.01，P＜0.01);與己烯雌酚組相比，四藥復(fù)方組Tb.Th顯著增加(P＜0.01)，而Tb.Sp顯著減少（

22、P＜0.05）;％L.Pm和BFR/TV顯著增加(P＜0.05，P＜0.05)。
　?、谂c去卵巢組比較，四藥復(fù)方組腰椎松質(zhì)骨動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;與己烯雌酚組相比，四藥復(fù)方組Tb.N顯著減小(P＜0.05)，而Tb.Sp顯著增加(P＜0.05); MAR和BFR/BS組顯著增加(P＜0.05，P＜0.05)。
　?、叟c去卵巢組比較，四藥復(fù)方組脛骨中段骨動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;與己烯雌酚組相比，四藥復(fù)方組骨外膜礦化沉積率

23、(P-MAR)顯著增加(P＜0.05)。
　?、芩乃帍?fù)方可使去卵巢大鼠股骨骨密度顯著增加(P＜0.05);與去卵巢組相比，四藥復(fù)方組彈性載荷和彎曲能量顯著增高(P＜0.05，P＜0.05);與己烯雌酚組相比，四藥復(fù)方組彈性載荷和彎曲能量顯著增高(P＜0.05，P＜0.05)。
　　(2)與去卵巢組比較，四藥復(fù)方組腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX顯著增高(P＜0.01)血清TC、TG和LDL-C顯著降低(P＜0.01，P＜0.01，

24、P＜0.01)。與己烯雌酚組相比，四藥復(fù)方組TG和Ca顯著降低(P＜0.01，P＜0.05)，ALP顯著升高(P＜0.05)。
　　(3)與去卵巢組比較，四藥復(fù)方對大鼠體重影響不顯著，肺臟指數(shù)顯著降低(P＜0.05);與己烯雌酚組相比，四藥復(fù)方組腦、肝臟、脾臟、腎上腺、腎臟和肺臟指數(shù)顯著降低（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01）。
　　(4)與去卵巢組比較，四藥復(fù)方組使子宮重量

25、及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)。與己烯雌酚組相比，四藥復(fù)方組子宮指數(shù)顯著降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.去卵巢可導(dǎo)致典型的高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松，伴隨骨生物力學(xué)性能降低，并造成體重升高，子宮萎縮，血脂紊亂，腦過氧化物酶降低。
　　2.己烯雌酚可預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松，降低骨轉(zhuǎn)換水平，增強(qiáng)骨生物力學(xué)性能，使大鼠體重降低，子宮增厚，血膽固醇降低，但甘油三酯升高，腦過氧化物酶升高。
　　3

26、.復(fù)方腦復(fù)康可有效預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松，抑制骨吸收而不抑制骨形成，增強(qiáng)骨生物力學(xué)性能，對大鼠體重影響不大，子宮刺激作用輕，血甘油三酯降低，腦過氧化物酶水平升高。
　　4.復(fù)方阿司匹林可有效預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松，抑制骨吸收而不抑制骨形成，骨生物力學(xué)性能無統(tǒng)計學(xué)差異，大鼠體重減輕，子宮增厚，血膽固醇和甘油三酯降低，腦過氧化物酶水平升高，單氨氧化酶水平降低。
　　5.四藥復(fù)方可部分預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松，抑制骨吸收而不抑