用于三維培養(yǎng)氣道平滑肌細胞的多孔支架材料的制備與表征研究.pdf

1、三維高分子支架的孔隙結構在組織工程中扮演著重要的角色，因為它為細胞提供重要的骨架結構，使種植的細胞生長成為有功能性的組織。本課題采用冷凍干燥法（相分離法）制備了殼聚糖-明膠三維多孔支架材料。在本課題中，利用冰晶微粒作為制孔劑，通過不同的濃度和預凍溫度來獲得不同孔隙度和孔徑的多孔支架。在研究支架的結構時，通過掃描電鏡圖像觀察到，當材料濃度越低(1wt％)預凍溫度越高（-20℃）時，形成支架的孔徑最大，為60-100μm；而當支架孔隙度最大

2、，為93％時，支架確是在預凍溫度為-196℃，濃度為1wt％時形成的。
　　 同時還考察了殼聚糖-明膠支架的密度、吸水性、體外降解性。發(fā)現(xiàn)支架的密度隨著殼聚糖-明膠混合物濃度的增大而增大；支架的濃度越低，預凍溫度越高，吸水性越好；支架的濃度越小，預凍溫度越低，越易降解。
　　 本課題還建立了分離和體外培養(yǎng)大鼠氣道平滑肌細胞的方法，通過組織貼塊法獲得的大鼠氣道平滑肌細胞生長狀態(tài)和形態(tài)良好，七代以內可作為種子細胞使用。

3、>　　 將原代培養(yǎng)氣道平滑肌細胞（airway smooth muscle cell，ASMC）第4代，接種于殼聚糖-明膠是三維支架中，通過MTT法發(fā)現(xiàn)平滑肌細胞的增殖情況良好，同時發(fā)現(xiàn)支架的孔隙度對細胞的增殖有顯著的影響，即支架的孔隙度越大，細胞的增殖情況越好。通過掃描電鏡以及免疫熒光染色觀察到細胞在支架上的生長狀態(tài)良好。
　　 研究表明冷凍干燥法可以作為一種備用方法來構建三維多孔支架。本研究構建的高度交聯(lián)的具有一定功能的殼