甲狀腺自身免疫與流產(chǎn)相關(guān)性的臨床與實驗研究.pdf

1、論文一妊娠4-8周母體甲功正常甲狀腺自身免疫與亞臨床甲減對低危婦女流產(chǎn)影響的前瞻性隊列研究
　　背景:
　　近20年，單純性甲狀腺自身免疫、亞臨床甲減與不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性成為內(nèi)分泌學(xué)界、圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的熱點問題。研究表明單純性甲狀腺自身免疫、亞臨床甲減可導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局如流產(chǎn)、早產(chǎn);胎兒腦發(fā)育障礙、后代智力水平可能降低，以及產(chǎn)后甲狀腺炎發(fā)生風(fēng)險增加。當前，證據(jù)較多的是二者是流產(chǎn)、特別是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的危險因素。然而，在妊娠

2、早期針對甲狀腺疾病的低危人群進行甲狀腺自身免疫和亞臨床甲減篩查，評估其對流產(chǎn)的影響尚未見報告。
　　目的:
　　本研究旨在觀察妊娠4-8周甲狀腺疾病低危婦女單純性甲狀腺免疫、亞臨床甲減與妊娠20周前發(fā)生流產(chǎn)的相關(guān)性。
　　方法:
　　共篩查3315例妊娠4-8周婦女，采集空腹血液標本，空腹靜脈促凝血分離血清，測定甲狀腺功能[TSH和FT4(Free thyroxine)]和甲狀腺自身抗體[甲狀腺過氧化物酶抗體(T

3、hyroid peroxidase antibody，TPOAb)和甲狀腺球蛋白抗體(Thyroglobulin antibody，TgAb)]?；谏鲜鼋Y(jié)果將研究人群分為4組:(1)甲功正常、甲狀腺自身抗體陰性組(euthyroidism，ET);(2)單純亞臨床甲減組(isolated subclinical hypothyroidism，SCH);該組依據(jù)TSH水平分為兩個亞組:SCH1組2.5≤TSH＜5.22 mIU/L; S

4、CH2組5.22≤TSH＜10 mIU/L;(3)單純甲狀腺自身免疫組（isolated thyroid autoimmunity，isolated TAI）: TPOAb和/或TgAb陽性;(4)亞臨床甲減合并甲狀腺免疫組(SCH+TAI)，該組依據(jù)TSH水平分為SCH+TAI1和SCH+TAI2兩個亞組。研究終點為妊娠20周前發(fā)生的流產(chǎn)。
　　結(jié)果:
　　1.與ET組相比，SCH2組（7.1 versus2.2％，矯正危

5、險度[aOR]3.40(95％可信區(qū)間[CI]:1.62-7.15;P=0.002)、isolated TAI組(5.7 vs2.2％，aOR2.71，95％CI1.43-5.12;P=0.003),SCH+TAI1組(10.0 vs2.2％, aOR4.96,95％ CI2.76-8.90;P=0.000)與SCH+TAI2組(15.2 vs2.2％, aOR9.56,95％ CI3.76-24.28;P=0.000)流產(chǎn)風(fēng)險均增加，

6、而SCH1組顯示出無統(tǒng)計學(xué)意義的流產(chǎn)風(fēng)險增加(3.5versus2.2％, aOR1.62,95％ CI0.96-2.73;P=0.083)。
　　2.存在甲狀腺免疫和/或亞臨床甲減的妊娠婦女流產(chǎn)發(fā)生的妊娠周數(shù)較ET組（11.13±3.21周）提前，在SCH1組為（10.79±1.77）周(P=0.046);SCH2組為（9.70±1.47）周(P=0.02);單純性TAI組為（9.91±1.74）周(P=0.033);SCH+T

7、AI1組為（9.59±1.97）周（P=0.022）;SCH+TAI2組為（8.88±1.24）周(P=0.020)。
　　結(jié)論:
　　妊娠4-8周甲狀腺自身免疫、亞臨床甲減婦女流產(chǎn)風(fēng)險增加，且二者使流產(chǎn)發(fā)生的妊娠周數(shù)提前。這兩種情況共存的妊娠婦女發(fā)生流產(chǎn)的風(fēng)險最高。
　　論文二甲功正常甲狀腺自身免疫流產(chǎn)動物模型的建立
　　背景:
　　研究表明單純性甲狀腺自身免疫可導(dǎo)致妊娠婦女流產(chǎn)風(fēng)險增加，其機制至今未明。

8、理想動物模型的建立是深入研究疾病的發(fā)病機制、探索有效治療措施的途徑之一。對于甲狀腺自身免疫的流產(chǎn)動物模型曾有相關(guān)報道，但流產(chǎn)動物的甲功檢測表明出現(xiàn)了甲減或亞臨床甲減的表現(xiàn)，故流產(chǎn)不能除外由甲功改變所致的影響，為此，建立甲功正常的單純甲狀腺自身免疫的流產(chǎn)動物模型對甲狀腺自身免疫導(dǎo)致流產(chǎn)的機制的研究至關(guān)重要。
　　目的:
　　構(gòu)建甲功正常的單純TgAb陽性的甲狀腺自身免疫CBA/J孕鼠流產(chǎn)動物模型。
　　方法:
　　

9、本研究以25μg與75μg劑量的小鼠甲狀腺球蛋白(mTg)免疫CBA/J雌鼠，誘導(dǎo)自身免疫性甲狀腺炎動物模型，甲狀腺內(nèi)呈淋巴細胞浸潤，體內(nèi)可檢測到較高滴度TgAb，與Balb/c雄鼠交配，于妊娠13.5天比較各組TgAb、甲狀腺淋巴細胞浸潤評分、甲功、胚胎吸收率和受孕率。
　　結(jié)果:
　　1.Con組、25μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠TSH、TT4各組間無差異(P＞0.05);
　　2.25μg與75μg

10、mTg免疫CBA/J孕鼠自身免疫性甲狀腺炎發(fā)病率、甲狀腺淋巴細胞浸潤評分與Con組相比明顯增加(P＜0.05);25μg與75μg兩組間比較，75μg mTg免疫組較高（58.7％ vs72.1％，P＜0.05）;
　　3.25μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠血清TgAb滴度均Con組明顯增高;25μg與75μg兩組間比較，75μg mTg免疫組血清TgAb滴度更高，但兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);
　　4.2

11、5μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠胚胎吸收率較Con組明顯增高(33.3％vs3.1％，P＜0.05)(45.63％ vs3.1％，P＜0.05)，比較25μg與75μg mTg免疫兩組胚胎吸收率無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);
　　5.25μg與75μg mTg免疫CBA/J孕鼠受孕率較Con組明顯降低(65.3％ vs93.1％，P＜0.05)(55.63％vs93.1％，P＜0.05)，比較25μg與75μg mTg免

12、疫兩組受孕率無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.mTg免疫可以使CBA/J小鼠致甲狀腺自身免疫，在妊娠13.5日仍存在淋巴細胞浸潤，免疫后孕鼠胚胎吸收率明顯增加，受孕率降低，但兩個免疫劑量之間并無差異;
　　2.mTg免疫后小鼠體內(nèi)均出現(xiàn)較高抗體，免疫劑量增加抗體滴度也增加，但25μg與75μg兩種劑量免疫所產(chǎn)生抗體滴度無差異;
　　3.75μg mTg免疫CBA/J小鼠可誘導(dǎo)甲功正常單純TgAb

13、陽性的自身免疫異基因交配的流產(chǎn)動物模型。
　　論文三 PD-1/PD-L1抑制途徑在甲功正常甲狀腺自身免疫誘導(dǎo)小鼠流產(chǎn)中對母胎耐受的影響
　　背景:
　　無論是臨床試驗，還是動物模型，均表明抗體陽性的自身免疫性甲狀腺炎與流產(chǎn)相關(guān)，然而，具體機制尚未闡明。妊娠是一個精細而復(fù)雜的生理過程，類似于同種異體移植，作為同種移植物的胚胎在母體內(nèi)存活直至分娩，實際上反映母體對胚胎抗原的免疫耐受，這種母胎耐受包括母胎界面免疫耐受及外周

14、免疫耐受，一旦免疫耐受被打破，母體對胎兒表現(xiàn)為免疫排斥，將導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。程序性細胞死亡分子-1（programmed cell death-1，PD-1）/程序性死亡配體(programmed celldeath ligand，PD-L)共刺激途徑是近年發(fā)現(xiàn)的負性共刺激通路，由于其獨特的抑制功能備受矚目。PD-1（也稱CD279），屬于免疫球蛋白超家族成員，表達較為廣泛。PD-1有PD-L1和PD-L2兩種配體，多項研究表明通過干預(yù)P

15、D-L2并沒有觀察到預(yù)期的免疫調(diào)節(jié)作用，而PD-L1（也稱B7-H1或CD274）在多種免疫細胞組成性表達，在免疫豁免部位，如胎盤也有表達，PD-L1的廣泛表達也提示它對外周免疫耐受、母胎耐受的形成與維持具有重要意義。
　　目的:
　　本研究旨在觀察PD-1/PD-L1抑制途徑在母體單純性TgAb陽性誘導(dǎo)小鼠流產(chǎn)中的作用。
　　方法:
　　以75μg mTg免疫CBA/J雌鼠，誘導(dǎo)異基因交配自身免疫性甲狀腺炎孕鼠

16、流產(chǎn)模型，弗氏佐劑免疫作為對照組。
　　留取血清，取完整甲狀腺組織，多聚甲醛固定制作石蠟切片蘇木素和伊紅(Hematoxylin and eosin，HE)染色。取胎盤、脾制成單細胞，免疫熒光染色、流式細胞學(xué)檢測Treg、Th17細胞及PD-1與PD-L1在上述細胞中的表達。實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative Real-Time Reverse Transcripte Polymerase ChainReacti

17、on, real-time RT-PCR)法檢測叉頭蛋白P3(forkhead box P3，F(xiàn)oxp3)、視黃酸受體相關(guān)孤兒受體γt（Retinoic acid receptor-related orphan receptorγt，RORγt）和白細胞介素-17(Interleukin-17，IL-17)的信使核糖核酸(Messenger ribouncleicacid，mRNA)在胎盤、脾細胞表達水平。
　　結(jié)果:
　　

18、1.mTg免疫CBA/J孕鼠胎盤Treg細胞比例低于對照組，同時孕鼠胎盤Foxp3mRNA水平亦低于對照組(P＜0.05)，而CD4+亞群中CD25Foxp3+細胞比例在兩組間無差異(P＞0.05)，CD25Foxp3細胞在兩組間也無差異(P＞0.05);mTg免疫CBA/J孕鼠脾臟Treg細胞比例低于對照組(P＜0.05)，同時孕鼠脾臟Foxp3mRNA水平亦低于對照組（P＜0.05），CD4+亞群CD25-Foxp3+細胞在兩組間無

19、差異(P＞0.05)，CD25-Foxp3-細胞在兩組間也無差異(P＞0.05)。
　　2.mTg免疫CBA/J孕鼠胎盤Th17細胞比例高于對照組(P＜0.05);mTg免疫CBA/J孕鼠脾臟Th17細胞比例與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，同時孕鼠脾臟IL-17 mRNA水平與對照組相比亦無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）;mTg免疫CBA/J孕鼠Tre g/IL-17比例在胎盤增高(P＜0.05)。
　　3.PD-1在

20、mTg免疫CBA/J孕鼠的胎盤與脾的CD4+T細胞中表達的比例增加(P＜0.05)，在CD4+CD25+Foxp3+ Treg細胞中表達的比例增加(P＜0.05)，PD-L1在mTg免疫CBA/J孕鼠的脾臟與胎盤的CD4+T細胞中表達的比例降低(P＜0.05)，在CD4+CD25+Foxp3+ Treg細胞中表達的比例降低(P＜0.05);mTg免疫CBA/J孕鼠的胎盤與脾臟的PD-1 mRNA水平亦高于對照組(P＜0.05)，胎盤與脾