蝮蛇毒致大鼠ALI時內(nèi)源性H2S-CSE體系的變化.pdf

1、目的：建立大鼠蝮蛇毒中毒性ALI模型，觀察該過程中不同時間點肺組織形態(tài)學(xué)、肺損傷評分、血漿中IL-1β、IL-10含量及H2S/CSE體系的變化趨勢，探討蝮蛇毒素誘導(dǎo)ALI的發(fā)病機制。
　　方法：⑴健康雄性SD大鼠48只，隨機分為兩組，一組為生理鹽水對照組（NS組），一組為實驗組（蝮蛇毒素組），生理鹽水對照組大鼠腹腔注射生理鹽水0.2ml，實驗組大鼠腹腔注射蝮蛇毒溶液0.2ml（江浙蝮蛇毒凍干粉1.5mg/Kg，用生理鹽水0.2m

2、l稀釋），分別于實驗設(shè)計的1h、6h、12h、24h四個時間點隨機處死兩組中各6只大鼠，限點收集標(biāo)本。⑵分別對兩組各時間點標(biāo)本檢測肺 PaO2、W/D的變化，BCA法檢測 BALF中蛋白含量，去蛋白法檢測血漿中 H2S含量、亞甲基藍(lán)法檢測肺組織 CSE活性、ELISA法檢測血漿中IL-1β和IL-10的含量，肺組織HE染色觀察病理變化。
　　結(jié)果：①肺組織病理變化及病理評分。生理鹽水對照組肺組織在高倍光鏡下顯示，肺泡結(jié)構(gòu)比較完整，

3、肺泡間隔沒有增寬，僅在個別肺泡腔內(nèi)可以見到少量淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞。與對照組1h相比，實驗組1h時病理變化不明顯，病理評分略增高，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與對照組相比，實驗組6h、12h、24h肺組織則受損比較明顯，肺泡結(jié)構(gòu)的完整性被破壞，肺泡之間隔有增寬，腔內(nèi)伴隨大量炎性滲出，可見大量浸潤的炎性細(xì)胞，在部分肺泡腔內(nèi)可以觀察到出血現(xiàn)象，且時間越長，肺損傷越嚴(yán)重，病理評分越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。②PaO2的變化及

4、其與病理損傷評分的相關(guān)性分析。對照組大鼠PaO2在1h、6h、12h、24h四個時間點無明顯變化（P>0.05）。與對照組1h相比，實驗組1h大鼠PaO2輕度升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;與對照組相應(yīng)時間點相比，實驗組6h、12h、24h時大鼠PaO2明顯降低，實驗時間越長，降低幅度越大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。相關(guān)性分析顯示：PaO2變化與肺病理損傷呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=-0.9444，P<0.01，有統(tǒng)計學(xué)意義

5、。③肺W/D的變化及其與病理損傷評分的相關(guān)性分析。對照組大鼠肺組織W/D在1h、6h、12h、24h四個時間點變化輕微（P>0.05）。與對照組1h相比，實驗組1h大鼠肺W/D略升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與對照組相應(yīng)時間點相比，實驗組6h、12h、24h時大鼠肺組織W/D升高明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。相關(guān)性分析顯示：肺 W/D組織變化與肺病理損傷呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù) r=0.9045，P<0.01，有統(tǒng)計學(xué)意

6、義。④BALF中蛋白含量的變化及其與病理損傷評分的相關(guān)性分析。對照組大鼠 BALF中蛋白含量在1h、6h、12h、24h四個時間點差異很?。≒>0.05）。與對照組1h相比，實驗組1h大鼠BALF中蛋白含量升高幅度小，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與對照組相應(yīng)時間點相比，實驗組6h、12h、24h時大鼠BALF中蛋白含量明顯升高，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。相關(guān)性分析顯示：BALF中蛋白含量的變化與肺病理損傷呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù) r

7、=0.9085，P<0.01，有統(tǒng)計學(xué)意義。⑤血漿中H2S含量和肺組織CSE活性的變化及二者與病理損傷評分的相關(guān)性分析。對照組大鼠血漿中H2S含量和肺組織CSE的活性在1h、6h、12h、24h四個時間點變化不顯著（P>0.05）。與對照組相比，實驗組1h大鼠血漿中H2S含量和肺組織CSE活性開始降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），隨時間延長，對照組6h、12h、24h時組大鼠血漿中 H2S含量和肺組織 CSE活性持續(xù)降低，差異有統(tǒng)

8、計學(xué)意義（P<0.01）。相關(guān)性分析顯示：大鼠血漿中H2S含量和肺組織CSE的活性的變化與肺病理損傷呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.9163，r=-0.9430，均有P<0.01，有統(tǒng)計學(xué)意義。⑥大鼠血漿中 IL-1β和 IL-10濃度的變化及二者與H2S含量和肺組織CSE活性的相關(guān)性分析。對照組大鼠血漿中IL-1β和IL-10濃度在1h、6h、12h、24h四個時間變化不明顯（P>0.05）。與對照組比較，實驗1h組大鼠IL-1β和

9、IL-10濃度明顯升高（P<0.01），隨時間延長，實驗組6h、12h、24h大鼠IL-1β和IL-10濃度較1h組有所下降，但均明顯高于對照組相應(yīng)時間點值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示：大鼠血漿中IL-1β和IL-10濃度與H2S的含量和肺組織CSE的活性呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.8837、r=-0.8486、r=-0.9409、r=-0.9410，均有P<0.01，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：⑴蝮蛇毒