脂肪組織內(nèi)源性H2S的產(chǎn)生及其在胰島素抵抗發(fā)生中的變化.pdf

1、目的:觀察脂肪組織及脂肪細(xì)胞是否能夠內(nèi)源性產(chǎn)生硫化氫(H2S)及其影響因素;探討脂肪組織內(nèi)源性產(chǎn)生的H2S是否參與胰島素抵抗的發(fā)生及其可能的機(jī)制。
　　方法:用亞甲基蘭法測(cè)定大鼠腎周脂肪組織、附睪脂肪組織及肩胛骨脂肪組織內(nèi)源性H2S的產(chǎn)率以及年齡、葡萄糖濃度對(duì)H2S產(chǎn)率的影響;分別采用Western Blot與RT-PCR檢測(cè)生成H2S的關(guān)鍵酶--CSE及CBS蛋白和mRNA的表達(dá);用[3H]標(biāo)脫氧右旋葡萄糖(2-[3H]DG)吸

2、收法檢測(cè)H2S對(duì)基礎(chǔ)條件下及胰島素刺激的脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取的影響;在果糖誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠模型上觀察附睪脂肪組織內(nèi)源性CSE/H2S體系的變化情況。
　　結(jié)果:
　　1、Western Blot和RT-PCR結(jié)果顯示,白色脂肪組織(腎周脂肪組織、附睪旁脂肪墊)及棕色脂肪組織(肩胛骨脂肪組織)有CSE和CBS mRNA及CSE蛋白的表達(dá),其中以附睪脂肪組織表達(dá)水平最高;亞甲基蘭法結(jié)果顯示腎周脂肪、附睪脂肪、肩胛骨脂肪都可以內(nèi)

3、源性產(chǎn)生H2S,附睪脂肪組織產(chǎn)率最高;附睪脂肪組織H2S的產(chǎn)量在6h時(shí)達(dá)到最大值;CSE抑制劑PPG和BCA能顯著抑制脂肪組織H2S的產(chǎn)生;進(jìn)一步分離脂肪細(xì)胞和前脂肪細(xì)胞發(fā)現(xiàn)二者均有CSE蛋白表達(dá)和H2S的釋放。
　　2、脂肪組織重量、體重、脂肪重量與體重的比值隨年齡增長(zhǎng)而增加;Western Blot結(jié)果顯示腎周脂肪組織和附睪脂肪組織CSE蛋白表達(dá)也隨年齡增長(zhǎng)而增加,灰度掃描結(jié)果顯示腎周和附睪脂肪組織12月齡的相對(duì)灰度比值分別增

4、加為1月齡的5.5倍和4.4倍(P<0.01);同時(shí),腎周和附睪脂肪組織H2S產(chǎn)率也呈漸增趨勢(shì):與1月齡相比,12月齡的H2S產(chǎn)率分別增加了71％和74%(P<0.01);脂肪組織H2S產(chǎn)率在生理血糖濃度(5mmol/L)時(shí)達(dá)到最高,約為20mmol/L時(shí)H2S產(chǎn)率的2倍(P<0.01),而在低于或高于該濃度時(shí)H2S產(chǎn)率均降低,20mmol/L葡萄糖孵育附睪脂肪組織15-120min后H2S產(chǎn)率呈時(shí)間依賴性降低。
　　3、10-1

5、000μmol/L的H2S溶液呈濃度依賴性的抑制脂肪細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)下和胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖攝取;生成H2S的反應(yīng)底物L(fēng)-cys/PLP使基礎(chǔ)狀態(tài)下脂肪細(xì)胞葡萄糖的攝取減少39%( P<0.01),使胰島素刺激的脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取降低了55%(P<0.01);給予PPG后基礎(chǔ)狀態(tài)下的脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取增加了48%(P<0.01),對(duì)胰島素刺激的脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取沒(méi)有明顯影響。
　　4、果糖誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠H2S產(chǎn)率顯著降低,約為正常

6、對(duì)照組的68%(P<0.01);而CSE蛋白表達(dá)卻顯著升高,約為正常對(duì)照組的1.96倍(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、脂肪組織中有CSE和CBS mRNA及CSE蛋白的表達(dá),可以內(nèi)源性生成H2S;
　　2、年齡、葡萄糖濃度可以影響脂肪組織H2S的產(chǎn)生;
　　3、H2S可以呈濃度依賴性抑制脂肪細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)下和胰島素刺激的葡萄糖攝取;
　　4、胰島素抵抗大鼠脂肪組織CSE蛋白表達(dá)顯著上調(diào),與血漿胰島素水