蟬花寄生真菌菌絲提取物退翳明目作用研究.pdf

1、目的：分離鑒定藥材蟬花的寄生真菌，從抗細(xì)菌、抗 I型單純皰疹病毒(HSV-I)和對小鼠抗體生成能力及巨噬細(xì)胞吞噬功能等免疫功能的調(diào)節(jié)三方面來研究寄生真菌菌絲提取物退翳明目作用及機(jī)理，探索蟬花寄生真菌的藥用價值，為新藥開發(fā)奠定實(shí)驗基礎(chǔ)。
　　方法：①采集杭州云溪竹徑竹園里的藥材蟬花，從僵蟲體、子座芽、孢子分離其寄生真菌,采用微室培養(yǎng)法根據(jù)菌絲形態(tài)和產(chǎn)孢子情況進(jìn)行鑒定。②液體發(fā)酵獲得真菌菌絲，經(jīng)口給藥，測定菌絲提取物對ICR小鼠的絕對

2、致死劑量、半數(shù)致死劑量和最大耐受量。③采用液體稀釋法測定菌絲提取物對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、傷寒沙門菌等細(xì)菌的最低抑菌濃度，研究抗細(xì)菌作用。④抗病毒作用：采用預(yù)防法（不同濃度菌絲提取物預(yù)先與Vero細(xì)胞孵育2h，再以 HSV-I感染細(xì)胞）、治療法(先以 HSV-I侵染Vero細(xì)胞2h，再加入不同濃度的菌絲提取物)、同時法（HSV-I與不同濃度的菌絲提取物同時加入Vero細(xì)胞中），用MTT法檢測Vero細(xì)胞活性，以細(xì)胞活性高低判斷菌絲

3、提取物的抗病毒作用。⑤免疫功能的調(diào)節(jié)作用：菌絲提取物以4.00g/kg、1.00g/kg劑量喂飼ICR小鼠，生理鹽水作為對照，以綿羊紅細(xì)胞作為抗原免疫小鼠，檢測抗紅細(xì)胞抗體（即溶血素），研究菌絲提取物對 ICR小鼠抗體生成的影響；分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，雞紅細(xì)胞吞噬實(shí)驗測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)，觀察菌絲提取物對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果：①分離獲得蟬花寄生真菌,經(jīng)鑒定為蟬擬青霉屬真菌；蟬擬青霉可離

4、開寄主人工培養(yǎng)，液體發(fā)酵可獲得菌絲，得率為150g/L。②ICR小鼠急性毒性實(shí)驗顯示，菌絲提取物基本無毒，ICR小鼠的最大耐受量為160g/kg。③蟬擬青霉菌絲提取物對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌（ATCC25923）、大腸埃希菌（ATCC25922）、傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、痢疾志賀菌、甲型副傷寒沙門菌、乙型副傷寒沙門菌、肺炎克雷伯菌沒有抑制和殺傷作用。④研究不同濃度的菌絲提取物抗 HSV-1作用發(fā)現(xiàn)，0.39

5、?25 mg/mL濃度范圍內(nèi)，預(yù)防法、治療法、同時法均能不同程度地抑制HSV-1對Vero細(xì)胞的致病變效應(yīng)，其中預(yù)防法效果最好，抑制率最高達(dá)87.89％。⑤以4.00g/kg和1.00g/kg蟬擬青霉菌絲提取物喂飼小鼠，均可顯著提高小鼠血清溶血素水平（p<0.01）；小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性較生理鹽水對照組顯著提高（p<0.01）。
　　結(jié)論：從藥材蟬花分離得到其寄生真菌蟬擬青霉。小鼠急性毒性實(shí)驗未發(fā)現(xiàn)蟬擬青霉菌絲提取物的毒性。