載5-Fu-Bevacizumab凝膠對青光眼濾過術(shù)后傷口愈合調(diào)控作用的研究.pdf

1、目的：探討羧甲基殼聚糖交聯(lián)京尼平凝膠負載5-氟尿嘧啶(5-Fu)和抗VEGF單克隆抗體(Bevacizumab)的合成方法。評價該凝膠對新西蘭大白兔青光眼濾過手術(shù)后濾過區(qū)傷口愈合的調(diào)控作用及安全性。 方法：1.利用京尼平與羧甲基殼聚糖進行交聯(lián)反應(yīng)制備凝膠。載藥凝膠的合成采用原位合成方法，即加入京尼平前在羧甲基殼聚糖溶液里加入5-Fu及Bevacizumab。將羧甲基殼聚糖與京尼平按比例為1：0.1，1：0.6，1：1.2(w/w

2、)凍干凝膠置于pH7.4PBS溶液中，每半小時取出，吸水后稱重，以評價凝膠的溶脹性能。將載藥凝膠置于37℃ pH7.4的PBS溶液中，每時間點取出釋放溶液，用紫外分光光度計測量5-Fu濃度，用考馬斯亮藍法測量Bevacizumab的濃度，計算藥物從凝膠中釋放的累積釋放率。2.制作新西蘭大白兔青光眼濾過手術(shù)模型，術(shù)后濾過區(qū)旁結(jié)膜下注射載5-Fu凝膠或載5-Fu/Bevacizumab凝膠0.3ml作為實驗組，設(shè)立單純手術(shù)組、絲裂霉素C(M

3、MC)組、多次注射5-Fu組、Bevacizumab組及空白凝膠組作為對照組。術(shù)后進行裂隙燈檢查，觀察濾過泡形態(tài)、結(jié)膜、角膜、前房炎癥反應(yīng)、虹膜周切口及晶狀體，裂隙燈下前置鏡觀察視網(wǎng)膜，用非接觸眼壓計測量眼壓，實驗組于術(shù)后7，14，21，28天處死動物，對照組于術(shù)后7，14，28天處死動物，各組均用錐藍—茜素紅染色法評價角膜內(nèi)皮活性，進行濾過區(qū)病理切片，HE及Masson染色，觀察術(shù)區(qū)組織結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：1.通過將羧甲基殼聚糖與京

4、尼平交聯(lián)能形成墨綠色凝膠。隨著京尼平加入量的增加，凝膠的溶脹率減少。羧甲基殼聚糖：京尼平分別為1：0.1，10.6，1：1.2(w/w)時，溶脹率分別約為17，12，7。載藥凝膠中5-Fu的體外釋放在4-5小時達到平衡，累積釋放率達約100％，Bevacizumab的體外釋放約在8小時達到平衡，累積釋放率達約15％。2.載5-Fu/Bevacizumab凝膠組能維持術(shù)后低眼壓至少于術(shù)后28天，與MMC組、多次注射5-Fu組相當，較單純手

5、術(shù)組、Bevacizumab組、空白凝膠組的時間明顯延長，載藥凝膠組較單純手術(shù)組在術(shù)后能維持較高的濾過泡。各組術(shù)后早期均有不同程度眼瞼、球結(jié)膜水腫、充血，凝膠組較其他組稍明顯，于4-6天內(nèi)消退；凝膠組3眼(11.54％)出現(xiàn)明顯角膜水腫，于術(shù)后1周完全消失；各組前房炎癥反應(yīng)及出血均于術(shù)后1周內(nèi)消失；各組未發(fā)現(xiàn)術(shù)后晶狀體混濁及視網(wǎng)膜脫離。組織分析載藥凝膠較對照組能減少濾過區(qū)組織疤痕形成，凝膠周圍組織沒有明顯炎癥細胞浸潤，動物體內(nèi)凝膠體積逐