系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者Vγ9Vδ2 T細(xì)胞受體CDR3區(qū)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其抗原識(shí)別的相關(guān)研究.pdf

1、自身免疫性疾病發(fā)病率高、臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣、病情遷延反復(fù)，給病人造成終身性痛苦，并給家庭和社會(huì)帶來嚴(yán)重的疾病負(fù)擔(dān)。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)是常見的典型的自身免疫性疾病。大多數(shù)自身免疫性疾病的病因和發(fā)病機(jī)制并不完全明了，目前尚有效治療手段使其完全治愈，僅可用腎上腺皮質(zhì)激素及免疫抑制劑來控制病情，且有相當(dāng)一部分病人對這些治療不敏感。
　　 T細(xì)胞免疫在抗腫瘤、抗病毒、自身免疫性

2、疾病和移植免疫等方面顯示出重要的作用。γδT細(xì)胞作為一種獨(dú)特的T細(xì)胞亞群，兼具特異性和非特異性免疫應(yīng)答雙重特征，有其獨(dú)特的受體特點(diǎn)和生物學(xué)特性，可以在無抗原呈遞細(xì)胞參與的情況下識(shí)別保守的內(nèi)源性抗原和壓力誘導(dǎo)的抗原，提示γδT細(xì)胞可能參與自身免疫性疾病的發(fā)生與發(fā)展。
　　 T細(xì)胞受體(Tcellreceptor,TCR)是T細(xì)胞特異性識(shí)別抗原和產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答的至關(guān)重要的受體。近幾十年來，盡管對γδT細(xì)胞的研究取得了很大的進(jìn)

3、展，但人們對γδTCR識(shí)別配體的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)尚不完全明了；同時(shí)，γδTCR的配體鑒定方面的進(jìn)展也較緩慢。至今，比較明確的γδT細(xì)胞配體還寥寥無幾。不了解γδTCR所識(shí)別的配體，也就不可能深入了解γδT細(xì)胞的生物學(xué)功能。因此，發(fā)現(xiàn)和鑒定γδTCR所識(shí)別的配體成為γδT細(xì)胞研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，也是進(jìn)一步澄清γδTCR抗原識(shí)別特異性和多樣性機(jī)制以及揭示γδT細(xì)胞的生物學(xué)功能的關(guān)鍵問題。
　　 在本研究第一部分，首先，通過對SLE患者外周血

4、中γδT細(xì)胞受體互補(bǔ)決定區(qū)3(Complementarity determining region 3，CDR3)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，比較了SLE患者VγCDR3區(qū)及VδCDR3區(qū)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選擇多位SLE患者共同優(yōu)勢表達(dá)的TCRδ2-CDR3序列合成相應(yīng)多肽，利用免疫熒光和酶免疫等技術(shù)來觀察上述多肽與SLE患者的血漿/細(xì)胞的結(jié)合特性；第二，我們采用免疫熒光技術(shù)驗(yàn)證了γδT細(xì)胞在狼瘡腎組織中有浸潤傾向，并選擇人腎組織來源的HK-2細(xì)胞作為后

5、續(xù)研究的靶細(xì)胞；第三，采用多種方法驗(yàn)證了SLE優(yōu)勢表達(dá)的TCRδ2CDR3序列可以與HK-2細(xì)胞表面結(jié)合，并可以顯著封閉γδT細(xì)胞對正常細(xì)胞系HK-2的殺傷作用，提示SLE優(yōu)勢表達(dá)的TCRδ2CDR3序列可以識(shí)別并結(jié)合HK-2細(xì)胞表面的某種分子；最后，從HK-2的細(xì)胞總蛋白中分離與SLE優(yōu)勢表達(dá)的TCRδ2CDR3序列特異性結(jié)合的蛋白，利用質(zhì)譜技術(shù)對篩選到的蛋白抗原進(jìn)行蛋白種類的鑒定，并對該蛋白配體在HK-2細(xì)胞表面的表達(dá)進(jìn)行了驗(yàn)證。<

6、br>　　 免疫調(diào)節(jié)的紊亂是引起自身免疫病的重要因素。T細(xì)胞的免疫負(fù)向調(diào)節(jié)機(jī)制主要包括三個(gè)方面：抑制性T細(xì)胞、活化T細(xì)胞的凋亡、免疫細(xì)胞的抑制受體。在第二部分內(nèi)容中，我們觀察了SLE患者γδT細(xì)胞表面活化標(biāo)志、激活性受體和抑制性受體的表達(dá)情況，希望能夠進(jìn)一步豐富γδT細(xì)胞功能的現(xiàn)有知識(shí)，從另外一個(gè)角度闡明這群獨(dú)特的細(xì)胞在SLE發(fā)病中起作用。
　　 通過上述研究工作，我們得出了如下主要結(jié)論：
　　 1．找到了γδT細(xì)胞γ

7、鏈CDR3區(qū)在γδT細(xì)胞抗原識(shí)別中起作用的線索，證實(shí)了Vγ鏈的表達(dá)除與目前已報(bào)道的與γδT細(xì)胞選擇性的組織浸潤有關(guān)外，也參與γδT細(xì)胞的抗原識(shí)別過程；
　　 2．發(fā)現(xiàn)了γδT細(xì)胞Vγ鏈CDR3區(qū)與Vδ鏈CDR3區(qū)在SLE病變過程中的變化差異，其生物學(xué)意義在于有助于深入了解γδT細(xì)胞受體的抗原識(shí)別過程；
　　 3．找到了SLE患者優(yōu)勢表達(dá)的TCRδ-CDR3序列，證明了CDR3δ在決定γδTCR識(shí)別抗原特異性上的關(guān)鍵作用，