RIPK4表達與舌鱗癌臨床特點及生物學特性之間的關系.pdf

1、目的：
　　口腔鱗狀細胞癌(OSCC)是全球第六大常見癌癥[1]，主要發(fā)生在舌、頰、牙齦、腭、上頜竇。臨床以舌鱗狀細胞癌(TSCC)最常見，其五年生存率較低(48.0％～70.9％)，腫瘤局部控制率也較低[4]。目前對TSCC的腫瘤發(fā)生的機制尚不清楚。
　　RIPK4（Receptor-interacting serine/threonine kinase protein4）首次發(fā)現(xiàn)于酵母雙雜交實驗中蛋白激酶C(PKC)β1

2、和PKCδ交互的一種蛋白[5，6]。不正常的表皮細胞分化導致RIPK4缺陷小鼠圍產期死亡。RIPK4-/-小鼠表皮棘突層和顆粒層增厚，從而使表皮增厚，在最外層含有角化不全細胞，而不是無核鱗狀上皮細胞。RIPK4可自發(fā)調控表皮細胞的分化[10]。RIPK4是一種錨蛋白，含有重復序列的蛋白激酶，在細胞分化[10]和皮膚炎癥[11-13]中是必不可少的。
　　本研究的目的是探索RIPK4表達與舌鱗癌臨床特點及其生物學特性的關系。

3、　　方法：
　　本研究收集的109例組織標本取自浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科及病理科，2006年1月至2012年12月期間手術切除并經病理證實。其中有73例舌鱗狀細胞癌患者的癌組織及36例與其相對應舌部手術切除的癌旁正常組織。根據WHO病理分級標準，這些舌癌患者中有32例為高分化腫瘤，23例中分化腫瘤，18例低分化腫瘤。其中有20例發(fā)生淋巴結轉移。所有的患者手術前均未接受過放療，化療，或任何其他介入性姑息治療等抗腫瘤治療

4、，并經過了當?shù)貍惱砦瘑T會的批準。所有標本為腫瘤的中心部分并粉碎在液氮冷研缽或固定在10％福爾馬林中并包埋在石蠟中。臨床收集患者的性別，年齡，學歷，飲酒、抽煙習慣，高血壓、糖尿病病史，及是否有淋巴結轉移等相關參數(shù)。石蠟包埋切片，兔抗RIPK4單克隆抗體免疫組織化學染色，并用多元回歸分析RIPK4表達水平與腫瘤分化程度及各種臨床特點是否存在關聯(lián)。人舌鱗癌細胞系TCA-8113轉染pRIPK4或pRIPK4-shRNA質粒后，對其表達量做熒光

5、實時定量PCR檢測mRNA表達，WesternBlot檢測RIPK4蛋白水平表達變化。劃痕實驗和細胞侵襲實驗觀察RIPK4表達改變后細胞遷移能力和細胞侵襲能力是否改變。
　　結果：
　　RIPK4在癌旁正常組織和正常舌上皮細胞中正常表達。高分化腫瘤RIPK4表達水平高，低分化RIPK4表達水平明顯下降，高分化舌鱗癌的RIPK4的平均分值為2，中分化為1.2，低分化為0.54。癌旁正常組織RIPK4 mRNA水平均高于不同分化

6、程度舌鱗癌。表明RIPK4水平與舌鱗癌分化程度顯著相關。RIPK4水平與患者年齡相關(r=0.66，P=0.04)，患者31～55歲平均值為1.13，56～69歲平均值為1.65(R=0.03，P＜0.01)。RIPK4水平和性別之間有顯著的關聯(lián)。男性有較高RIPK4水平（P=0.03，卡方檢驗）。而教育程度，酗酒，吸煙，糖尿病，高血壓和淋巴結轉移對RIPK4水平沒有影響。我們轉染pRIPK4， pNC-shRNA，或pRIPK4-sh

7、RNA的進入TCA-8113細胞。四組不同的RIPK4轉染率均大于60％，并沒有表現(xiàn)出任何的統(tǒng)計學意義。對RIPK4 mRNA的表達，TCA-8113的侵襲和遷移能力進行了測定，發(fā)現(xiàn)RIPK4表達下降后其遷移和侵襲能力顯著增加。這些結果表明，RIPK4在舌鱗癌細胞系TCA8113的遷移和侵襲中起重要作用。共聚焦激光掃描圖像顯示，正常舌組織和NOK細胞胞漿中RIPK4強烈表達，而在舌鱗癌樣品和TCA8113細胞中其表達水平顯著下降。