肺癌患者胸腔積液中VEGF、VEGFmRNA及EndostatinmRNA的表達及臨床意義.pdf

1、目的：
　　 肺癌是我國高發(fā)腫瘤，且絕大多數(shù)肺癌可引起惡性胸水，目前臨床上常用的胸腔積液查瘤細胞的方法敏感性甚低，文獻報道為58％，部分胸腔內(nèi)已有明顯腫瘤轉(zhuǎn)移或復發(fā)的患者，胸腔積液中細胞學檢查仍可為陰性。
　　 常規(guī)的細胞學檢查主要是依靠癌細胞的形態(tài)特點進行診斷。由于癌細胞在積液中無組織及器官構(gòu)架的束縛而自由漂浮和增生甚至經(jīng)幾代繁殖，失去了原來在組織中的形態(tài)特征，故單純依靠形態(tài)學進行診斷敏感性較低，尤其是較早期異型性不太

2、明顯的癌細胞與反應性間皮細胞幾乎無法區(qū)別，以至造成診斷結(jié)果中存在著相當數(shù)量的假陰性。建立一組科學、有效的診斷方法是提高肺癌診斷陽性率的有效途徑，也是提高肺癌患者生存率與治愈率的關鍵。
　　 本課題以目前國內(nèi)外死亡率較高的肺癌為主攻對象，以肺癌患者的胸水為檢測基礎，采用RT-PCR方法檢測癌細胞中VEGF和內(nèi)皮抑素的轉(zhuǎn)錄水平；采用免疫細胞化學[2]檢測VEGF在癌細胞中的定位表達。探討診斷肺癌性胸水的新途徑，評價這三種檢測指標單-

3、和聯(lián)合應用對肺癌性胸水的臨床應用價值。
　　 方法：
　　 收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2008年4月至2009年11月門診及住院患者128例，其中：原發(fā)性肺癌92例，肺良性疾病患者36例。
　　 1、免疫細胞化學染色
　　 (1)收集胸水中細胞沉渣制作石蠟包埋塊。
　　 (2)切片，應用免疫細胞化學方法（streptavidin-peroxidase，S-P）染色。檢測VEGF的表達情況。

4、>　　 2、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(Reverese transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)擴增及擴增產(chǎn)物的分析
　　 (1)收集胸水中細胞沉渣提取總RNA。
　　 (2)總RNA的反轉(zhuǎn)錄及VEGF和endostatin基因片段的擴增。
　　 (3)銀染色觀察并分析結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫細胞化學檢測VEGF，RT-PCR檢測VE

5、GF-mRNA和endostatin-mRNA在肺癌患者胸水中的陽性率均高于良性胸水中陽性表達率，差異非常顯著(P＜0，05)。
　　 2、用RT-PCR的方法聯(lián)合檢測VEGF-mRNA和endostatin-mRNA其敏感性和準確性分別是95.7％(88/92)，93.7％(120/128)，明顯高于單項檢測和常規(guī)細胞學檢查。
　　 3、檢測VEGF、VEGF-mRNA及endostatin-mRNA在肺腺癌性胸腔積液

6、與肺鱗癌性胸腔積液中比較，兩者差異不顯著(P＞0.05)。
　　 4、肺癌患者胸腔積液中VEGF-mRNA的陽性表達率(82.6％)高于免疫細胞化學檢測VEGF陽性表達率(71.7％)(P＜0.05)，檢測VEGF-mRNA對肺癌胸膜微轉(zhuǎn)移具有臨床應用價值。
　　 討論
　　 在胸腔積液產(chǎn)生的過程中，血管生成因子和抑制血管生成因子都起到重要的作用。VEGF和endostatin分別是目前研究發(fā)現(xiàn)的作用最強，特異性

7、最高的血管生成促進因子和抑制因子。尤其是肺癌引起的胸腔積液中，VEGF被認為是最重要的血管生成因子之一，對胸腔積液的產(chǎn)生起到了重要的作用。以前的研究表明，VEGF能促進腫瘤血管生成，以提供腫瘤生長所需要的營養(yǎng)條件，并進一步為腫瘤的轉(zhuǎn)移打下基礎，同時可能通過多種途徑刺激產(chǎn)生大量的endostatin，抑制原發(fā)和繼發(fā)腫瘤血管的生成，與血管生成促進因子的作用對抗，達到一種平衡。
　　 采用RT-PCR技術檢測胸水內(nèi)的微轉(zhuǎn)移癌細胞，以達

8、到早期診斷目的。該方法具有較高的敏感性，可在106～107個細胞中檢測到1個目標細胞。此外，RNA在細胞外環(huán)境中非常不穩(wěn)定，如在胸水內(nèi)檢測出VEGF-mRNA和endostatin-mRNA，則從理論上可以認為胸水中有癌細胞的存在。以前的研究表明，endostatin的產(chǎn)生能抑制VEGFmRNA的合成，且早期肺癌患者胸腔積液中內(nèi)皮抑素的水平是增高的，本研究采用了endostatin-mRNA和VEGF-mRNA聯(lián)合診斷的方法，能進一步提

9、高診斷的敏感度和準確度。本課題中，有4位癌癥患者的標本，細胞學檢測是良性，但我們的結(jié)果顯示endostatin-mRNA和VEGF-mRNA都為陽性，我們的實驗比細胞學更早更準確的判斷出了患者的病情。本研究結(jié)果提示在惡性胸腔積液的形成過程中內(nèi)皮抑素和VEGF扮演了重要的角色，這與以前研究的結(jié)果是一致的。
　　 本研究中，應用免疫細胞化學檢測VEGF，RT-PCR方法檢測VEGF-mRNA和endostatin-mRNA可有效的提

10、高肺癌胸水診斷的敏感度，單獨應用敏感度最高的為VEGF-mRNA達82.6％，三種檢測指標兩兩聯(lián)合應用時，兩種檢測方法單一及聯(lián)合應用對肺癌性胸水診斷效能的比較，VEGF-mRNA和endostatin-mRNA聯(lián)合應用有較高的敏感度和準確度分別是95.7％(88/92)，93.7％(120/128)對診斷癌性胸水有重要的臨床價值，可作為研究早期癌細胞播散的一種重要方法，具有廣泛的應用前景。
　　 結(jié)論：
　　 1、應用免