補(bǔ)腎活血法治療帕金森病的作用機(jī)理研究.pdf

1、目的： 帕金森病(Parkinson’s disease，PD)屬難治性疾病，嚴(yán)重影響中老年人身體健康，目前病因仍然不清楚，可能與環(huán)境、遺傳、老齡化等因素有關(guān)。近年來中醫(yī)藥治療本病取得一定進(jìn)展，但對(duì)其治療PD的機(jī)理、作用途徑等方面的研究較少。本課題通過建立帕金森病動(dòng)物模型，采用免疫組織化學(xué)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及正電子發(fā)射斷層掃描成像(PET)等方法，觀察大鼠腦組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)等方面的變化，評(píng)價(jià)中藥補(bǔ)腎活

2、血飲對(duì)帕金森病的治療作用，并探討其作用機(jī)理，為PD治療提供新思路。 方法： 將110只SD大鼠用隨機(jī)數(shù)字法分為正常對(duì)照組20只及造模組90只，造模組采用右側(cè)黑質(zhì)微量注射6-OHDA的方法建立PD大鼠模型，將成功建立模型的53只大鼠隨機(jī)分為中藥治療組27只及模型組26只，中藥治療組給予補(bǔ)腎活血飲灌胃，對(duì)照組及模型組分別給予同等劑量生理鹽水灌胃治療8周。 觀察治療前后阿樸嗎啡(APO)誘發(fā)大鼠偏側(cè)旋轉(zhuǎn)行為變化；分別于

3、對(duì)照組、治療組、模型組各隨機(jī)抽取10只大鼠進(jìn)行腦黑質(zhì)部位酪氨酸羥化酶(TH)免疫組化染色，觀察各組大鼠TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量變化，評(píng)價(jià)中藥補(bǔ)腎活血飲對(duì)PD大鼠模型的治療作用。 于各組隨機(jī)抽取1只大鼠，分別在治療前后于尾靜脈注射成像放射性示蹤劑11C-β-CFT進(jìn)行PET顯像，觀察各組大鼠腦內(nèi)DAT變化情況，并運(yùn)用視覺分析方法分析對(duì)照組、治療組、模型組治療前后顯像變化。 將對(duì)照組、治療組、模型組其余9、16、15只大鼠，斷頭取腦

4、，采用RT-PCR方法檢測(cè)大鼠腦組織孤兒核受體(Nurr1)及乙酰膽堿毒蕈堿型受體5(M5)mRNA相對(duì)于內(nèi)參基因β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)值。 所有數(shù)據(jù)均采用CHISS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果： 1．中藥補(bǔ)腎活血飲能明顯改善PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為，旋轉(zhuǎn)次數(shù)與模型組比較明顯減少(P＜0.01)。TH免疫組化染色顯示：模型組損毀側(cè)黑質(zhì)致密部TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞體積縮小，與之相比，補(bǔ)腎活血飲治療組

5、黑質(zhì)致密部TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增多(P＜0.01)，細(xì)胞體積增大。 2．以11C-β-CFT為放射性示蹤劑的PET成像顯示模型大鼠腦組織損傷側(cè)DAT下降，表現(xiàn)為兩側(cè)不對(duì)稱。治療后治療組大鼠損毀側(cè)紋狀體顯影顯示放射性濃聚上調(diào)，與健側(cè)基本對(duì)稱，而模型組則無明顯變化，仍表現(xiàn)為損毀側(cè)較健側(cè)明顯稀疏。 3．RT-PCR方法檢測(cè)各組Nurr1及M5受體的mRNA表達(dá)的相對(duì)值比較顯示：模型組明顯低于對(duì)照組及治療組(P＜0.01)，而對(duì)

6、照組同治療組之間無顯著差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1. 6-OHDA誘發(fā)法制作PD模型成功率高，模型穩(wěn)定、可靠； 2．補(bǔ)腎活血飲能夠明顯改善PD模型大鼠的旋轉(zhuǎn)行為； 3．DAT、Nurr1、M5受體、TH在帕金森的發(fā)病過程中相互作用、相互影響，最終引起腦內(nèi)多巴胺減少，導(dǎo)致PD的發(fā)生，補(bǔ)腎活血飲能夠促進(jìn)DAT釋放，增加Nurr1、M5受體mRNA表達(dá)，提高TH含量，這可能是其通過多靶點(diǎn)增加多巴胺含量，防