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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
本實(shí)驗(yàn)意在通過(guò)檢測(cè)外周血細(xì)胞Foxp3mRNA的表達(dá)水平探索AD患者外周血CD4+CD25+Tr的情況,并通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)外周血清中TGF-β(轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β)及IL-10(白介素-10)的表達(dá)水平來(lái)討論其對(duì)AD(特應(yīng)性皮炎)的發(fā)病過(guò)程起到的作用,為探索其發(fā)病機(jī)制及治療方向提供參考。
實(shí)驗(yàn)方法:
提取AD組和正常對(duì)照組人群的總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA后,經(jīng)qRT-PCR檢測(cè)Fox
2、p3mRNA的表達(dá)水平(人GAPDH作為內(nèi)參照基因)。每一份標(biāo)本的SYBRⅡ熒光定量PCR反應(yīng)做3個(gè)重復(fù)管,取平均CT值計(jì)算。同一標(biāo)本擴(kuò)增基因得到的CT值分別標(biāo)記為CTGAPDH和CTFOXP3,以△CT目的基因=CT目的基因-CTGAPDH計(jì)算得到△CTFOxP3,△△CT=△CT實(shí)驗(yàn)-△CT對(duì)照組,差別倍數(shù)2-△△CT。用2-△△CT的方法分析比較各組的RNA相對(duì)表達(dá)水平變化。
采用夾心抗體酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別
3、檢測(cè)患者組及對(duì)照組血清中IL-10,TGF-β的水平,分別比較兩組血清中IL-10,TGF-β水平的差異,用(x)±s表示用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P<0.05有統(tǒng)計(jì)意義。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
?。ㄒ唬〢D患者及健康人中Foxp3+mRNA表達(dá)水平:
qRT-PCR結(jié)果顯示:Foxp3mRNA在AD組的表達(dá)和正常對(duì)照組比較,表達(dá)水平是健康對(duì)照組的76.8%,即低于正常組。
?。ǘ〢D患者
4、及健康人中IL-10,TGF-β的水平:
1.IL-10水平:患者組為(117.112±60.854)高于對(duì)照組(53.609±36.393),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.TGF-β水平:患者組(1011.896±575.206)高于對(duì)照組(483.533±373.044),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1、AD患者T細(xì)胞表達(dá)Foxp3較對(duì)照組減少。
2、AD患
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