shRNA介導(dǎo)PIAS3基因表達(dá)下調(diào)對(duì)人結(jié)腸癌COLO205細(xì)胞株增殖和調(diào)亡的影響.pdf

1、目的：檢測(cè)取自人體不同部位、不同Dukes分期的人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480（取自結(jié)腸癌組織，Dukes B期）、SW620（取自結(jié)腸癌淋巴轉(zhuǎn)移組織，Dukes C期）及COLO205（取自結(jié)腸癌腹腔轉(zhuǎn)移腹水組織，Dukes D期）中PIAS3的表達(dá)水平，篩選PIAS3相對(duì)高表達(dá)細(xì)胞株進(jìn)行shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染干預(yù)實(shí)驗(yàn)；通過(guò)轉(zhuǎn)染PIAS3 shRNA質(zhì)粒，下調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞株中PIAS3基因的表達(dá)水平，研究該基因的差異性表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖活性、調(diào)

2、亡和細(xì)胞周期的影響。
　　方法：運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-Time PCR）及蛋白免疫印跡（Western blot）檢測(cè)SW480、SW620及COLO205三種人結(jié)腸癌細(xì)胞株中PIAS3基因的表達(dá)水平；運(yùn)用脂質(zhì)體介導(dǎo)將PIAS3shRNA質(zhì)粒及無(wú)關(guān)序列shRNA對(duì)照質(zhì)料轉(zhuǎn)染入人結(jié)腸癌細(xì)胞株，干預(yù)后區(qū)分為：PIAS3shRNA轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染PIAS3shRNA質(zhì)粒）、無(wú)關(guān)序列shRNA轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)序列對(duì)照質(zhì)粒）及空白對(duì)

3、照組（不進(jìn)行轉(zhuǎn)染干預(yù)）；采用Real-Time PCR、Western blot檢測(cè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染干預(yù)后 PIAS3基因的抑制效果；MTT（噻唑藍(lán)）法檢測(cè)PIAS3表達(dá)下調(diào)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖活性的影響；流式細(xì)胞儀檢測(cè) PIAS3表達(dá)下調(diào)對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞周期和調(diào)亡的影響。
　　結(jié)果：Real-Time PCR和Western blot檢測(cè)顯示，PIAS3在三種結(jié)腸癌細(xì)胞株中均呈陽(yáng)性表達(dá)，而在COLO205細(xì)胞株中的表達(dá)水平顯著高于其它兩種細(xì)胞

4、株，因此選擇COLO205細(xì)胞進(jìn)行shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染干預(yù)實(shí)驗(yàn)。與空白對(duì)照組及無(wú)關(guān)序列shRNA轉(zhuǎn)染組相比，PIAS3shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組COLO205細(xì)胞PIAS3基因在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)明顯降低。MTT分析顯示與無(wú)關(guān)序列 shRNA轉(zhuǎn)染組及空白對(duì)照組比較，PIAS3shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組COLO205細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng)。流式細(xì)胞儀分析顯示，PIAS3shRNA轉(zhuǎn)染組與無(wú)關(guān)序列shRNA轉(zhuǎn)染組及空白對(duì)照組相比，細(xì)胞增殖明顯增快，

5、G1、G2期細(xì)胞所占比例均減少，S期細(xì)胞所占比例顯著增多，細(xì)胞總調(diào)亡率明顯減少。
　　結(jié)論：PIAS3在SW480、SW620及COLO205三種結(jié)腸癌細(xì)胞株中均有表達(dá)。PIAS3shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染能有效抑制 PIAS3基因在結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平。PIAS3表達(dá)水平下調(diào)后，人結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖活性增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分裂，抑制其調(diào)亡。PIAS3是抑癌基因的論述，在人結(jié)腸癌中通過(guò)本實(shí)驗(yàn)得到進(jìn)一步的論證，為深入研究 PIAS3作為