TGF-β1-JNK信號通路在OLETF大鼠肺組織中的表達變化及干預研究.pdf

1、目的：糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）是一種慢性代謝障礙性疾病，持續(xù)性高血糖可導致一些組織器官的代謝異常、功能障礙以及結(jié)構(gòu)改變，研究證實DM肺損害也是DM全身多系統(tǒng)病變的一部分，DM可顯著增加肺纖維化的風險。轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming.growth factor beta1，TGF-B1）是促纖維化的細胞因子，在多種器官纖維化進程中扮演重要角色。c-Jun氨基末端激酶（c-Jun NS2-termina

2、lkinaLses，JNK）信號通路為TGF-B1下游的重要信號轉(zhuǎn)導通路，JNK的異常表達可影響TGF-B1的活性，進而改變纖維化的進程。近年研究發(fā)現(xiàn)，JNK過度激活與DM腎病以及非DM肺間質(zhì)纖維化密切相關，而關于TGF-B1/JNK信號轉(zhuǎn)導通路與DM肺纖維化的研究尚少。羅格列酮是過氧化物酶體增殖物激活受體γ（pcroxisomc proliferator-activated receptorγ，PPARγ）的合成配體，PPARγ具有調(diào)

3、節(jié)物質(zhì)代謝、抗炎及抗纖維化作用。本研究通過應用免疫組織化學方法觀察自發(fā)性DM大鼠--OLETF大鼠肺組織TGF-B1、磷酸化JNK（phosphorylated c-JunNil2-terminal kinases，p-JNK）及纖維連接蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）、Ⅲ型膠原的變化，探討TGF-B1/JNK信號途徑是否為DM肺纖維化的重要發(fā)病機制，并設立羅格列酮干預組，觀察上述指標的變化以探討羅格列酮是否對DM肺纖維化有保護作用

4、。
　　 方法：4周齡OLETF鼠30只和其同系非DM對照鼠LETO鼠8只，在無特定病原體級條件下單籠飼養(yǎng)，飼以標準飼料。大鼠每4周行一次口服葡萄糖耐量試驗（oral glucose-tolerance test，OGTT）。至30周齡時，共有成模OLETF大鼠16只，隨機分為模型組（DM組）8只和羅格列酮干預（Rosiglitazone，RGT組）組8只，LETO大鼠為正常對照組（Normal，N組）。RGT組每日以羅格列酮3

5、mg/kg的給藥劑量灌胃，DM組與N組以等量蒸餾水灌胃，各組均灌胃給藥12周，每日1次。42周齡時處死大鼠，留取肺組織，10％中性福爾馬林固定后進行如下步驟：①HE染色光鏡下觀察肺組織結(jié)構(gòu)變化；②Masson染色觀察肺組織膠原沉積情況；③用免疫組織化學方法定位肺組織TGF-B1、p-JNK、FN及Ⅲ型膠原的表達，并在光鏡下依據(jù)染色程度和陽性細胞百分率來評價TGF-B1、p-JNK陽性表達強度，運用Image-Pro Plus6.0圖像分

6、析系統(tǒng)測定平均光密度及陽性面積比來評價FN及Ⅲ型膠原陽性表達強度。
　　 結(jié)果：①HE染色結(jié)果顯示：N組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，DM組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，支氣管壁增厚，肺泡隔增寬，部分肺泡腔萎縮、塌陷，肺間質(zhì)增加，并有炎癥細胞浸潤。RGT組大鼠肺組織病變較DM組減輕，但肺組織結(jié)構(gòu)未恢復到正常。②Masson染色結(jié)果顯示：N組大鼠肺泡間隔、細支氣管、小血管周圍僅有少量膠原纖維；DM組肺間質(zhì)膠原纖維增多，排列紊亂，RGT組肺間質(zhì)膠原沉積

7、較DM組減輕，但仍未至正常。③免疫組織化學顯示：肺組織中TGF-B1主要分布于肺泡上皮細胞、支氣管上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞和肺成纖維細胞的胞漿。p-JNK則主要分布于肺泡上皮細胞、支氣管上皮細胞、平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞以及浸潤炎癥細胞的胞漿和胞核。FN及Ⅲ型膠原主要分布于細支氣管壁、小血管壁（主要是小動脈）的周圍及二者形成的支氣管血管束的結(jié)締組織內(nèi)。DM組與N組比較，TGF-B1、p-JNK、FN及Ⅲ型膠原表達增加（

8、P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義。RGT組與DM組比較，TGF-B1、p-JNK、FN及Ⅲ型膠原表達減少（P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：①OLETF大鼠肺組織出現(xiàn)病理結(jié)構(gòu)改變和FN、Ⅲ型膠原的沉積增多，呈現(xiàn)出纖維化趨勢，提示肺臟是DM的又一靶器官。②OLETF大鼠肺組織TGF-β1、p-JNK、FN、Ⅲ型膠原表達量較LETO大鼠顯著增加，提示TGF-β1/JNK信號轉(zhuǎn)導通路可能參與了DM肺纖維化過程。③羅格列酮