SATB1與相關MicroRNA在乳腺癌中的表達研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行了論述。
　　第一部分 SATB1在乳腺癌患者中的表達及其意義
　　目的:探討SATB1在乳腺癌患者中的表達及預后意義,并同目前臨床上常用4種標記物Ki-67、c-erbB-2、ER及PR的預后意義進行比較。
　　方法:篩選出的93例浸潤性導管癌患者標本,用免疫組織化學染色方法評估SATB1的表達。SATB1與4種標記物及臨床病理參數(shù)之間的關系進行相關性分析。SATB1的預后意義采用Kaplan-M

2、eier生存分析,log-rank檢驗比較SATB1不同表達水平的組間差異,多因素分析運用COX比例風險回歸模型,利用受試者工作特征曲線(ROC)判斷SATB1、Ki-67、c-erbB-2、ER及PR作為預后指標的敏感性和特異性。
　　結果:免疫組化結果顯示,SATB1的亞細胞定位具有異質(zhì)性,SATB1陽性染色主要集中在細胞核,但也有細胞漿染色陽性。SATB1胞漿陽性和胞核陰性在各臨床病理參數(shù)間無顯著差異,二者作為預后判斷時統(tǒng)計

3、學意義無差別。SATB1的表達與臨床分期相關(p=0.002),與Ki-67呈正相關(p<0.001),與ER/PR呈負相關(p分別為0.025和0.045),而SATB1與c-erbB-2表達不相關(p=0.63)。在中位隨訪72個月時,隨著SATB1表達強度的增加,乳腺癌患者的總生存期(OS)及無復發(fā)生存期(RFS)均縮短。在單因素和多因素分析中,只有SATB1顯著影響OS。將患者按不同的淋巴結狀態(tài)及諾丁漢預后指數(shù)(Nottingh

4、am Prognostic Index,NPI)劃分為不同的亞組,無論在淋巴結陰性組和淋巴結陽性組,預后良好組(NPI<3.4)和預后較差組(NPI≥3.4),均可依據(jù)SATB1表達的有無區(qū)分出不同的亞組人群。在ROC分析中, SATB1、Ki-67、c-erbB-2、ER及PR的曲線下面積(Area Under Curve,AUC)分別為0.859、0.662、0.637、0.586和0.498,提示 SATB1作為預后指標的敏感性和

5、特異性最佳。
　　結論:核定位表達的SATB1是乳腺癌患者一個穩(wěn)健的獨立預后指標。
　　第二部分 miRNA與SATB1在乳腺癌中表達的相關性研究
　　目的:本研究對可能調(diào)控SATB1表達的miRNA進行預測,并在乳腺癌患者標本中驗證是否有候選miRNA調(diào)控SATB1的表達。
　　方法:選取4種權威的miRNA靶基因預測軟件TargetScan、PicTar、miRanda和miRDB,預測與SATB1 mRNA

6、3'-UTR有互補結合位點的miRNA,將上述不同軟件預測的miRNA結果繪制成維恩圖,圖中交集部分為調(diào)控SATB1的候選miRNA。再用TaqMan實時定量RT-PCR檢測乳腺癌患者標本中候選miRNA的表達,并對miRNA和 SATB1的表達進行相關性分析。
　　結果:經(jīng)TargetScan、PicTar、miRanda及 miRDB軟件的預測,與SATB1的mRNA3'-UTR有互補結合位點的miRNA分別有22種、24種、

7、76種及75種。將上述4種軟件預測結果制作維恩圖。圖中交集為6種miRNA,分別是miR-7、miR-21、miR-23a、miR-23b、miR-34a及miR-155。在乳腺癌患者標本中,只有miR-34a的表達與 SATB1的表達呈負相關(p<0.001),并且,隨著miR-34a表達的下調(diào),SATB1的蛋白表達水平呈上升趨勢。miR-7與SATB1的表達有負相關傾向(p=0.056),而SATB1和其余4種miRNA表達均不相關

8、。
　　結論:SATB1可能是miR-34a一個新的靶基因。miR-34a表達的下調(diào)削弱對SATB1的抑制,從而導致乳腺癌患者疾病進展?；謴蚼iR-34a的表達可能是那些SATB1高表達患者的潛在治療方法。
　　第三部分 乳腺癌患者MIR34A啟動子區(qū)域的甲基化研究
　　目的:研究是否由MIR34A基因啟動子的甲基化而引起成熟miR-34a的表達量下降。
　　方法:利用EpiTect Fast FFPE Bisu

9、lfite Kit試劑盒對石蠟包埋組織乳腺癌患者的基因組DNA進行抽提及亞硫酸鹽修飾。通過甲基化特異PCR方法判斷MIR34A基因啟動子的甲基化狀態(tài),TaqMan實時定量RT-PCR檢測乳腺癌患者標本中成熟miR-34a的表達。分析MIR34A基因啟動子甲基化狀態(tài)與成熟miR-34a表達量之間的關系。
　　結果:在55例可供分析的乳腺癌患者中,MIR34A基因啟動子有16例(29％)為非甲基化,9例(16％)為甲基化,30例(55