大鼠發(fā)育過程中視網(wǎng)膜NgR蛋白的表達及RNA干擾對NgR基因表達調(diào)控的研究.pdf

1、NgR(Nogo receptor)是中樞神經(jīng)元細胞膜上的一種蛋白，該蛋白和p75<'NTR>及LINGO-1這兩種中樞神經(jīng)元細胞膜蛋白組成復合受體，介導了中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓磷脂中MAG、OMgp、Nogo對中樞神經(jīng)元軸突生長的抑制作用，從而造成了成年哺乳動物中樞神經(jīng)損傷后再生困難。在這個復合受體中NgR是抑制信號傳入細胞內(nèi)的第一步，因此，它的存在是中樞神經(jīng)元軸突生長受到抑制的關(guān)鍵。 RNA干擾是近年來發(fā)展起來的一種新的抑制特定基因

2、產(chǎn)物表達的方法，它通過雙鏈RNA的介導引起特異性的內(nèi)源性的與之序列相近的mRNA的降解，從而阻斷相應基因的表達，造成轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默。因其具有簡單快速、特異、高效和經(jīng)濟等特點，該方法廣泛應用于基因功能和基因治療研究。 根據(jù)這些研究，我們認為，如果能通過RNA干擾沉默NgR基因的表達，減少或阻止NgR蛋白的產(chǎn)生，使神經(jīng)生長抑制信號無法通過該蛋白組成的受體抑制神經(jīng)生長，有可能促進損傷后視神經(jīng)的再生修復以及功能的恢復，從而挽救視功

3、能。 本實驗的目的：觀察正常大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育過程中NgR蛋白表達的情況；研究siRNA對NgR基因表達的抑制作用。 本實驗分為兩個部分：1、使用免疫組化的方法觀察正常大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育過程中NgR蛋白的表達情況。2、研究siRNA對富含NgR蛋白的體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)細胞的NgR基因表達的抑制作用，為RNA干擾技術(shù)在視神經(jīng)損傷修復過程中的應用奠定實驗基礎(chǔ)。 主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1、出生24h的新生SD大鼠的視網(wǎng)膜

4、上就已經(jīng)存在NgR的表達，并且該表達貫穿于視網(wǎng)膜發(fā)育成熟的整個階段，提示髓磷脂蛋白抑制因子和NgR之間的相互作用對神經(jīng)元不僅僅是生長抑制作用，可能對神經(jīng)元的生長、發(fā)育和塑形都有影響。 2、以NgR基因為目標，根據(jù)siRNA的設(shè)計原則，體外化學合成siRNA，并使用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑對體外培養(yǎng)的富含NgR蛋白的海馬神經(jīng)細胞進行RNA干擾，結(jié)果在轉(zhuǎn)染48h后顯著下調(diào)了NgR基因的表達，但在一個星期后NgR基因的表達又恢復到了正常的