乙型肝炎病毒編碼蛋白HBx對(duì)人KCTD9基因的激活作用研究.pdf

1、重型肝炎是一種預(yù)后很差的疾病,我國(guó)以乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus)所致的重型肝炎為主(約占70％)。HBV所致重型肝炎的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜。目前研究認(rèn)為,重型肝炎發(fā)生發(fā)展的―啟動(dòng)或制控點(diǎn)‖受病毒和宿主兩個(gè)方面的因素以及這兩方面相互作用的影響。就乙型肝炎病毒自身因素方面而言,乙型肝炎病毒編碼的病毒蛋白被認(rèn)為在HBV相關(guān)的肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有著相當(dāng)重要的作用,并且可以調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)各類分子的表達(dá)以及影響著HBV的整個(gè)復(fù)制過(guò)程

2、等[1-3]。
　　人KCTD9基因位于人第8號(hào)染色體,其編碼蛋白屬于KCTD家族的一員。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)基因芯片對(duì)比重型乙型肝炎與慢性乙型肝炎輕度患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的基因水平表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)重型乙型肝炎患者PBMC中KCTD9mRNA水平大大高于慢性乙型肝炎輕度患者[4-7]。
　　為探討HBV編碼蛋白是否對(duì)人KCTD9具有激活作用,設(shè)計(jì)了下列試驗(yàn)。最先我們探討乙型肝炎病毒編碼蛋白能否對(duì)人KCTD9基因有著明顯的調(diào)

3、控作用。構(gòu)建三種HBV編碼蛋白HBc、HBs和HBx的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-HBc、pcDNA-HBs和pcDNA-HBx以及hKCTD9啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒,把病毒蛋白表達(dá)質(zhì)粒與啟動(dòng)子質(zhì)粒以及β半乳糖苷酶基因表達(dá)質(zhì)粒(β-Gal)共轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞系,研究HBV編碼蛋白是否對(duì)人KCTD9(hKCTD9)基因具有激活作用,并且明確何種病毒蛋白發(fā)揮活化基因的作用。通過(guò)檢測(cè)報(bào)告基因相對(duì)熒光素酶(Luciferase)值反映乙型肝炎病

4、毒編碼蛋白對(duì)hKCTD9基因的轉(zhuǎn)錄具有明顯激活作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HBV編碼的HBx蛋白能夠明顯激活hKCTD9基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。
　　在HBV編碼HBx蛋白作用下,為研究參與激活hKCTD9基因的順式作用元件,接下來(lái)做了一系列基因啟動(dòng)子的截短缺失試驗(yàn),成功構(gòu)建了一系列5‘端缺失、擁有同樣3‘端的hKCTD9基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,把上述質(zhì)粒分別與乙型肝炎病毒編碼的HBx蛋白真核表達(dá)質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染進(jìn)HepG2肝癌細(xì)胞中。研究結(jié)