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文檔簡介
1、目的:
觀察HBV C蛋白在NK細胞中的表達及其對NK細胞功能的影響,從而為乙型肝炎發(fā)病機制及防治的研究提供新的思路。
方法:
構(gòu)建HBV C基因真核表達載體pHBI-CMV-HBC,經(jīng)雙酶切及測序鑒定證實該重組真核表達質(zhì)粒含有所需目的基因。然后,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)入NK-92細胞;48h后,通過Western blotting檢測HBV C基因在NK-92細胞中HBV C蛋白的表達情況;然后通過MTT
2、比色法檢測NK-92細胞對HepG2細胞的細胞毒作用,用ELISA法檢測NK-92細胞分泌的IFN-γ水平。
結(jié)果:
經(jīng)酶切和測序鑒定證實,所構(gòu)建pHBI-CMV-HBC載體結(jié)構(gòu)正確,目的片斷與GeneBank中 HBV C基因完全符合,沒有發(fā)生突變。Western blotting結(jié)果表明,pHBI-CMV-HBC轉(zhuǎn)染NK-92細胞后,可在NK-92細胞中表達大小約為21KDa的C蛋白,并且可以和特異性抗HBc單克
3、隆抗體結(jié)合。MTT比色法結(jié)果顯示與兩個對照組相比,轉(zhuǎn)染了pHBI-CMV-HBC的NK-92細胞對于HepG2細胞的細胞毒活性有所提高,差異具有顯著性(P<0.01)。ELISA實驗表明,轉(zhuǎn)染了pHBI-CMV-HBC的NK-92細胞分泌 IFN-γ的水平也較上述兩對照組提高,差異具有顯著性(P<0.01)。
結(jié)論:
1、pHBI-CMV-HBC載體可以通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染到NK細胞中,并且在其中成功表達。
2
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