結(jié)直腸癌和肺癌KRAS和BRAF基因突變HRM檢測方法的建立.pdf

1、南方醫(yī)科大學2009級碩士學位論文結(jié)直腸癌和肺癌KRAS和BRAF基因突變HRM檢測方法的建立EstablishmentofhighresolutionmeltinganalysisfordetectingKRASandBRAFgenemutationsincolorectalcancerandlungcancer課題來源：自選專業(yè)名稱學位申請人指導教師答辯委員會主席答辯委員會成員臨床檢驗診斷學劉麗琴王捷教授姜儻教授裘宇容教授馬艷華教授

2、李薇教授李林海副教授論文評閱人陳曉東教授夏勇教授2012年4月10日中文摘要變?yōu)锳(T1799A)。BRAF在結(jié)直腸癌的高、中、低分化中表達的陽性率差異明顯，腫瘤分化程度越低，BRAF陽性表達率越高，可為結(jié)直腸癌的診斷、治療提供新的依據(jù)。目前，結(jié)直腸癌和肺癌的治療仍以手術(shù)治療為主，輔助以化學藥物治療、放射治療。但是，隨著腫瘤分子生物學、基因組學的不斷發(fā)展，腫瘤靶向治療預測指標及分子靶向治療藥物受到了越來越多的重視，并被逐漸應(yīng)用到臨床治療

3、當中。近些年來，結(jié)直腸癌和肺癌的治療領(lǐng)域中最大亮點是確定KRAS基因和BRAF基因狀態(tài)與抗EGFR抗體療效的相關(guān)性。最新的研究顯示，靶向治療藥物西妥昔單抗治療的有效性受KRAS基因和BRAF基因狀態(tài)的影響，突變型的KRAS基因和BRAF基因無需EGFR接收信號能夠自動活化該通路并啟動下游信號的轉(zhuǎn)導，因此只有野生型KRAS和BRAF基因的患者才能從抗EGFR的治療中獲益，而突變型的患者則不能。因此，美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)推薦在使

4、用抗EGFR單克隆抗體進行治療之前，先對患者進行KRAS和BRAF基因突變檢測。對于存在KRAS和BRAF突變的患者，不推薦使用抗EGFR單克隆抗體進行治療。目前，國內(nèi)外檢測基因突變的方法很多，如PCR產(chǎn)物直接測序法、Taqman探針法、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析法、限制性片段長度多態(tài)性分析方法、焦磷酸測序方法、變性高效液相色譜法、突變特異性擴增系統(tǒng)等。這些方法存在著成本高、操作復雜或靈敏度低等問題，不利于臨床大樣本檢測。目前全球缺乏基因突變檢

5、測的標準化規(guī)范，因此，尋找和建立一個低成本、高通量、簡便易行、準確可靠的檢測方法，推廣到臨床應(yīng)用，是一個亟待解決的問題。高分辨率熔解曲線分析法(K曲resolutionmelting，HRM)是在實時熒光定量PCR基礎(chǔ)上通過飽和染料監(jiān)控核酸的熔解曲線變化進行分析的一種新興分子診斷技術(shù)。HRM檢測無需使用序列特異性探針，不受突變堿基位點和種類的局限，具有高靈敏度、高特異性、操作簡便、低成本、高通量、閉管操作等優(yōu)點，可檢測石蠟包埋組織塊、血