鹿藿根提取物的抗生育研究及其化學(xué)成分分析.pdf

1、目的：研究鹿藿根溶劑提取物的抗生育作用并分析化學(xué)成分。
　　 方法：
　　 1.浸漬法和超聲波提取法聯(lián)合提取鹿藿根溶劑提取物；用柱層析法分離鹿藿根醋酸乙酯提取物和水提取物；用核磁共振、紅外光譜及質(zhì)譜等鑒定純品的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　 2.生育研究：
　　 (1 交配試驗觀察小鼠的生育能力：雄鼠灌胃給藥，雄雌合籠1周，分籠后10天處死并解剖雌鼠，了解妊娠情況，計算妊娠率、妊娠抑制率、妊娠抑制糾正率。
　　

2、 (2 附睪精子計數(shù)及活動度測定。
　　 (3 形態(tài)學(xué)檢查：雙固定法(NBF+Bouin’s)固定睪丸和附睪、HE 染色、光學(xué)顯微鏡觀察，了解形態(tài)學(xué)改變。戊二醛固定、鋨酸等染色，電鏡觀察了解睪丸、附睪超微結(jié)構(gòu)變化情況。熒光免疫組化技術(shù)了解巖藻糖苷酶在睪丸、附睪分布情況。
　　 (4小鼠超排卵體外受精實驗研究幾種純化合物的抗生育作用。
　　 3.抗菌實驗瓊脂平皿稀釋法測定鹿藿根提取物的最低抑菌濃度(MIC)。

3、>　　 結(jié)果：
　　 1.到4種鹿藿根提取物即乙醇提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水提物。4種提取物用浸漬法提取比例分別為7.7[％]、 0.62、0.64和7.03，用浸漬加超聲聯(lián)合提取的方法提取比例分別為17.9、1.70、1.74、16.2。
　　 2.4種提取物用雌雄合籠交配實驗法進(jìn)行了抗生育研究并進(jìn)行了作用強度比較。實驗以雷公藤多苷為陽性對照，用100 mg·kg-1 ·d-1，每天1 次，連續(xù)用藥11

4、周，結(jié)果4種提取物均能降低小鼠妊娠率，乙醇提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提物用藥各組的雌性小鼠妊娠率分別為30、20、40 及10，但正丁醇提取物所致小鼠妊娠率與正常對照組間差異無顯著性(P>0.05。
　　 3.兩種劑量(100 mg·kg-1 ·d-1、400 mg·kg-1 ·d-1)的醋酸乙酯提取物動態(tài)觀察對小鼠生育能力的影響，結(jié)果醋酸乙酯提取物的抗小鼠生育作用呈現(xiàn)量效關(guān)系且隨著用藥時間的延長作用相應(yīng)增強。同時

5、也發(fā)現(xiàn)該提取物的抗生育作用與附睪精子計數(shù)結(jié)果不完全一致。熒光免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，醋酸乙酯提取物對附睪管(包括精子和精漿)的巖藻糖苷酶含量有較明顯的降低作用。
　　 4.3種(25 mg·kg-1 ·d-1、100 mg·kg-1 ·d-1、400 mg·kg-1 ·d-1)劑量的鹿藿根水提物動態(tài)觀察對小鼠生育能力的影響，結(jié)果3種劑量下各組小鼠在第3周后的妊娠率分別為70、25、20，在第11周后分別為50、10、10，即在100m

6、g·kg-1 ·d-1、400 mg·kg-1 ·d-1 劑量時的抗生育作用明顯，而25 mg·kg-1 ·d-1 劑量時沒有明顯抗生育作用。電鏡觀察鹿藿根水提物影響睪丸生精細(xì)胞的成熟、生精細(xì)胞排列出現(xiàn)紊亂，附睪上皮細(xì)胞線粒體水腫、表面絨毛嚴(yán)重紊亂，附睪中精子頂體膜不規(guī)則隆起、精子尾端內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。
　　 5.對人及小鼠的體外殺精實驗結(jié)果顯示鹿藿根乙醇提取物及水提物的殺精作用稍強而醋酸乙酯提取物及正丁醇提取物的殺精作用稍弱，

7、但各組的殺精作用在體外沒有明顯差異。
　　 6.鹿藿根4種提取物對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的標(biāo)準(zhǔn)菌及臨床分離菌均有抗菌作用。其中乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的標(biāo)準(zhǔn)菌、臨床分離菌以及銅綠假單胞菌的臨床分離菌作用較強；正丁醇提取物對金黃色葡萄球菌的標(biāo)準(zhǔn)菌、臨床分離菌作用較強。除水提取物對臨床分離的大腸埃希菌作用較強外，其他提取物對大腸埃希菌的標(biāo)準(zhǔn)菌、臨床分離菌作用較弱。
　　 7.從醋酸乙酯提取物中分離出了6種

8、純化合物，其中5個新化合物，1個己知化合物(3-β-D-葡萄糖山萘酚)。根據(jù)其結(jié)構(gòu)分別命名為二氫異黃酮類化合物、3β-.葡萄糖豆甾.[2 4】_烯、3-β-D-葡萄糖山萘酚、7.甲氧基乙基山萘酚、3-β-D-葡萄糖.7.倍半萜烯山萘酚、β-甲基2，4一二甲氧基一L一吡喃巖藻糖苷和鑒定為α,β-D.吡喃葡萄糖和α,β-甲氧基一D.吡喃葡萄糖單糖的混合物。5個新化合物中，1個結(jié)構(gòu)全新(倍半萜烯山萘酚)、4個骨架類同而衍生物未知(二氫異黃酮類

9、化合物、 3β-葡萄糖豆甾.[2 4]-烯、7.甲氧基乙基.山萘酚、β一甲基2，4一二甲氧基-L-吡喃巖藻糖苷)。
　　 鹿藿根水提物用乙醇作為洗脫劑進(jìn)行柱層析，結(jié)果分離出一個純物質(zhì)，結(jié)構(gòu)鑒定并命名為5β，1 4.二羥基.3β-強心甾2 0(2 2).烯(新化合物)。
　　 8.5種純品的體外受精率分別是：二氫異黃酮6 2.2％、葡萄糖山萘酚4 3.0％、二甲氧巖藻糖苷3 8.9％、巖藻糖苷酶抗體39.4％、羥羧強心甾二

10、烯3 4.7％，而空白組為6 3.8％。其中羥羧強心甾二烯作用最強，二甲氧巖藻糖苷和巖藻糖苷酶抗體作用非常接近作用次之，二氫異黃酮在體外不抑制受精率。
　　 9.各組鹿藿根提取物對小鼠血清睪酮沒有明顯差異，體重的增長量與正常對照組問差異無顯著性。
　　 結(jié)論：鹿藿根乙醇提取物、鹿藿根醋酸乙酯提取物、鹿藿根水提物有抗雄性小鼠的生育作用，以鹿藿根水提物的作用最強。4種提取物還有抗菌作用。鹿藿根醋酸乙酯提取物有含量較多的二氫異