黃芪穴位注射及其與激素聯(lián)合使用對哮喘大鼠P38MAPK通路和細胞因子的影響.pdf

1、目的：
　　在前期研究的基礎上進一步研究黃芪穴位注射對p38 MAPK通路的影響，探討黃芪穴位注射對哮喘的治療效應及可能的作用機制，并初步探討黃芪穴位注射與地塞米松聯(lián)合用藥對哮喘大鼠的治療效果是否存在協(xié)同作用，為臨床推廣應用提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　將SPF級SD大鼠隨機分為6組，即正常組（A組）、哮喘模型組（B組）、鹽水穴位注射組（C組）、SB203580干預組（D組）、黃芪注射液穴位注射組(E組)及黃芪注射液

2、穴位注射+地塞米松聯(lián)合治療組(F組)，每組8只。經卵清白蛋白（OVA）+氫氧化鋁AL(OH)3混合液腹腔注射致敏和激發(fā)（1％OVA溶液霧化30min）建立哮喘模型。各組大鼠末次激發(fā)24小時后（實驗第29天）處死，取血清、肺泡灌洗液(BALF)及雙肺組織。左肺組織經固定后作石蠟切片，行HE和免疫組化染色，分別觀察肺組織病理學改變和軟件處理分析磷酸化p38 MAPK核陽性細胞平均灰度值,右肺組織提取蛋白，經蛋白印記法（Western blo

3、t）檢測大鼠肺組織磷酸化p38MAPK蛋白的表達；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法測定血清和肺泡灌洗液（BALF）上清液中白介素4（IL-4）、干擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-a）濃度。
　　結果：
　　1.大鼠異常行為情況：哮喘組（B組）大鼠經激發(fā)后逐漸出現(xiàn)呼吸急促、口唇發(fā)紺、煩躁不安、頻繁撓鼻、腹肌痙攣、毛色光澤減退等哮喘典型癥狀和體征，正常組（A組）大鼠活動正常，無上述異常表現(xiàn)，鹽水穴位注射組（C組）

4、大鼠與B組比較呼吸急促等癥狀和體征相似，SB203580干預組（D組）、黃芪穴位注射組（E組）、黃芪穴位注射+地塞米松聯(lián)合治療組（F組）大鼠與B組比較癥狀和體征減輕，其中D組減輕最明顯。
　　2.肺組織HE染色觀察：B組和C組大鼠肺組織結構破壞嚴重，支氣管管腔狹窄，支氣管上皮細胞脫落，平滑肌束增生肥大，支氣管管壁、管腔及血管周圍可見大量炎癥細胞浸潤等病理組織學改變，A組大鼠肺組織無上述改變，D組、E組、F組與B組相比不同程度減輕，

5、以D組減輕最為明顯，E組和F組減輕程度相當。
　　3.Western blot檢測磷酸化P38 MAPK結果：B組磷酸化P38 MAPK表達水平最高，A組表達水平最低；差異具有顯著性意義（P<0.05），E組與C組比較表達水平降低，差異顯著（P<0.05），E組與D組比較表達水平升高，差異顯著（P<0.05），E組與F組比較表達水平相當，差異無顯著性意義，（P>0.05）。
　　4.ELISA檢測血清和BALF IL-4、I

6、FN-γ、TNF-a水平：A組血清和BALF中IFN-γ水平最高，IL-4、TNF-a水平最低，B組血清和BALF中IL-4、TNF-a水平最高，IFN-γ水平最低，差異顯著（p<0.05）；E組與C組比較：血清和BALF中IL-4、TNF-α水平降低，IFN-γ水平升高，差異顯著（P<0.05），E組與D組比較：血清和BALF中IL-4、TNF-α水平升高，IFN-γ水平降低，差異顯著（P<0.05），E組與F組比較：血清和BALF中

7、IL-4、TNF-α、IFN-γ水平相似，差異無顯著性意義（P>0.05）。
　　結論：
　　1.P38 MAPK參與了支氣管哮喘的發(fā)病過程，對哮喘發(fā)病相關的細胞因子IL-4、TNF-a、IFN-γ均有調節(jié)作用。
　　2.黃芪穴位注射在一定程度上抑制哮喘大鼠P38 MAPK信號通路，減少細胞因子TNF-a的產生，并在一定程度上糾正TH1/TH2類細胞因子IFN-γ/IL-4的平衡失調，改善哮喘大鼠的氣道炎癥。