重組人IFN-λ1基因在大腸桿菌中的表達及其對角膜基質(zhì)細胞的抗病毒作用研究.pdf

1、目的：獲取重組人IFN-λ1(rhIFN-λ1)的原核表達產(chǎn)物并測定其效價，研究rhIFN-λ1對兔角膜基質(zhì)細胞的抗單純皰疹病毒(HSV)作用。 方法：用本實驗室構建的含基因重組表達載體pGEX-4T-λ1的大腸桿菌BL21，經(jīng)ITPG誘導表達和包涵體提取純化后獲取rhFN-λ1蛋白，采用微量滴定法測定其效價。采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)兔眼角膜基質(zhì)細胞，用微量細胞病變法比較rhIFN-λ1、IFN-α標準品對兔眼角膜基質(zhì)細胞的抗單純皰

2、疹病毒作用。 結(jié)果：誘導含基因重組表達載體PGEX-4T-λ1的大腸桿菌BL21后，采用12％SDS-PAGE蛋白電泳顯示出一條相對分子量約為33kDa的蛋白條帶；采用微量滴定法測定其效價，用IFN-α標準品校正其效價為62.5 IU/ml。125/2、125/4、125/8 IU/ml的IFN-α標準品、rhIFN-λ1均分別可抗32、16、8TCID<,50>HSV-I的感染。125/2、125/4、125/8 IU/ml的

3、IFN-α標準品分別可抗16、8、4TCID<,50>HSV-Ⅱ的感染；125/2、125/4、125/8 IU/ml的rhIFN-λ1分別可對抗8、4、2TCID<,50>HSV-Ⅱ的感染。 結(jié)論：含基因重組表達載體pGEX-4T-λ1的大腸桿菌BL21，經(jīng)ITPG誘導表達和包涵體提取純化后可獲得rhIFN-λ1，它對兔眼角膜基質(zhì)細胞有一定的抗單純皰疹病毒作用。rhIFN-λ1抗HSV-I的作用與IFN-α相近；rhIFN-λ