金龜子綠僵菌松墨天牛優(yōu)良菌株篩選及其林間宿存研究.pdf

1、松墨天牛是重大森林植物檢疫性病害-松材線蟲病的主要媒介昆蟲。本文主要內(nèi)容是篩選防治松墨天牛的金龜子綠僵菌優(yōu)良菌株，并研究金龜子綠僵菌在森林生態(tài)系統(tǒng)中的宿存動態(tài)，為利用天敵微生物防治松墨天牛提供菌株資源和理論依據(jù)。 從福建的40個縣(市、區(qū))、江西省井岡山和吉安2個市，共110個林分樣區(qū)(其中松林88個樣區(qū))采集土壤樣品330份，采用選擇性培養(yǎng)基分離土壤金龜子綠僵菌，結(jié)果21個樣區(qū)(其中松林16個)的26份土樣中分離到金龜子綠僵菌

2、，占采集樣區(qū)數(shù)的19.1％和樣品數(shù)的7.9％，土壤成菌落數(shù)(CFU)500-72500 CFU·g<'-1>，表明金龜子綠僵菌在森林土壤中有較為廣泛的分布。 對國內(nèi)外20株分離自不同寄主的金龜子綠僵菌菌株的產(chǎn)孢情況、孢子萌發(fā)率進行了研究。在此基礎(chǔ)上，采用幼蟲(3～4齡)浸漬法(1×10<'7>孢子·mL<'-1>)和成蟲跗節(jié)接種法測定對松墨天牛的致病力。結(jié)果不同菌株間產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率和致病力存在顯著差異，MaYTTR-04、M

3、aYTTR-03、MaZPTR-01、MaJGSTR-01、JPMa1291、JPMa1349、JPMa2049等7個菌株表現(xiàn)較為優(yōu)良；尤其是MaYTTR-04、MaYTTR-03、JPMa2049等3個菌株的綜合性狀最好，產(chǎn)孢量分別為(2.18±0.12)×10<'8>、(1.25±0.05)×10<'8>、(8.92±0.16)×10<'7>孢子·cm<'-2>；對幼蟲死亡的高峰期在15～18d，在接種后21d僵蟲率分別為80.0％

4、、76.0％和93.1％；3個菌株對成蟲的死亡高峰期在12～15d，接種后21d校正死亡率分別達93.3％(1.2×10<'6>±2.0×10<'5>孢子/成蟲)、86.7％(1.5×10<'6>±5.0×10<'5>孢子/成蟲)和94.4％(3.4×10<'6>±3.24×10<'5>孢子/成蟲)，僵蟲率分別達83.4％、88.9％和75.0％，其中Ⅱ級僵蟲(孢子覆蓋蟲體50％以上)分別為66.7％、55.6％和53.1％。

5、MaYTTR-04菌株在25±1℃恒溫條件下，接種量為2.3×10<'6>±0.2×10<'6>孢子/成蟲、2.3×10<'5>±0.2×10<'5>孢子/成蟲的情況下時間效應(yīng)指標值LT<,50>分別為14.7d和18.5d；而室溫條件下(25℃～32℃)，這兩個劑量相應(yīng)的LT<,50>分別為12.9d和17.9d，表明該菌在較高的變溫環(huán)境下仍具有較強致病力。林間套籠21d成蟲平均死亡率為60％，僵蟲率為48.9％。 將JPMa

6、1349、JPMa2049金龜子綠僵菌孢子置于馬尾松樹干表皮不同方位；將JP1349、JP2049、MaZPTR-01菌株孢子與土粉混合后埋入馬尾松純林、馬尾松與木荷混交林和馬尾松純林林窗等不同林分結(jié)構(gòu)的土壤中；將MaYTTR-04菌株感染的松統(tǒng)中的宿存動態(tài)。JPMa1349、JPMa2049菌株在樹干上的孢子，至168d仍有70％以上的萌發(fā)率(拐點萌發(fā)率，2005年1月31日～7月18日)；同一菌株在不同方位的萌發(fā)率存在一定差異，偏東

7、方向保持拐點萌發(fā)率時間較長，JPMa1349、JPMa2049菌株分別為196d、168d；偏西方向則較短，分別為163d、147d。兩個菌株70％以上萌發(fā)率平均拐點天數(shù)分別為166d和157d，差異不顯著。試驗前期萌發(fā)率較為整齊，標準差大多在10％以下，后期不同處理位點的萌發(fā)率差異較大。氣溫是影響孢子萌發(fā)的主要因子之一，樹干表皮孢子萌發(fā)率隨著溫度升高而下降，萌發(fā)率急速下降產(chǎn)生拐點的日期從5月開始，6～7月份下降最快，月平均溫度28℃左

8、右是孢子萌發(fā)率下降的一個明顯拐點。綠僵菌和白僵菌在樹干上宿存萌發(fā)率的趨勢是一致的，同一時間段萌發(fā)率不存在顯著差異。 在試驗地土表平均含孢量2.01×10<'8>孢子/成蟲的松墨天牛成蟲僵蟲，經(jīng)28d孢子量減少了2.14倍，至42d平均含孢量保持在7.01×10<'7>孢子/成蟲，到84d后含孢量降低到5.02×10<'6>孢子/成蟲水平，與成蟲跗節(jié)粘取孢子量(接種量)是同一數(shù)量級。在林間126d內(nèi)，各僵蟲體上的孢子萌發(fā)率雖然存在

9、顯著差異，但平均萌發(fā)率均保持在90％以上；僵蟲體上的孢子在接種濃度×10<'6>孢子·mL<'-1>數(shù)量級情況下，接種松墨天牛幼蟲后的校正死亡率仍有45.6％。 研究了JPMa1349、MaZPTR-01菌株在不同林分土壤中的萌發(fā)率，結(jié)果表明參試的菌株都一直保持在70％以上的較高水平。孢子在土壤中經(jīng)29d，數(shù)量分別下降到初始的27.8％和51.4％，在323d內(nèi)保持在10<'7>孢子·g<'-1>土壤以上水平，在211d內(nèi)對松墨

10、天牛幼蟲致死率和僵蟲率分別仍保持在55％和45％以上。 昆蟲病原菌自動攜播器已獲實用新型專利(專利號：ZL2005 2 009534.3.7)。本實用新型屬于一種昆蟲病原菌自動攜播裝置，它是由上部的誘捕器和下部的攜播器組成。其特征在于攜播器內(nèi)壁上半部放有病原菌的環(huán)帶，當進入攜播器的昆蟲通過環(huán)帶逃逸時，病原菌黏附于蟲體上伴隨昆蟲而擴散，尤其是可隨小蠹類等蛀干害蟲將病原菌帶入樹干內(nèi)，使松墨天牛等在樹干內(nèi)部為害的幼蟲感染病原菌的機會大

11、大提高。林間試驗攜播器懸掛點松墨天牛幼蟲感染金龜子綠僵菌僵蟲率比對照高32.1％。攜播器可在農(nóng)林害蟲防治中推廣應(yīng)用。 對綠僵菌遺傳多樣性進行了ISSR分析，結(jié)果7個ISSR引物在30個菌株中共擴增出81條帶，其中76條為多態(tài)條帶，多態(tài)性為93.82％，平均每個引物擴增出11.6條帶。通過POPGEN軟件分析發(fā)現(xiàn)不同綠僵菌居群間和居群內(nèi)均存在一定的遺傳變異。根據(jù)個體間的遺傳距離進行UPGMA聚類分析，結(jié)果顯示綠僵菌遺傳多樣性與地理