大鼠腦挫傷后腦組織β-APP、MAP-2的時(shí)序性表達(dá).pdf

1、目的：應(yīng)用免疫組化SABC法、Western blot免疫印跡法及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)性大鼠腦挫傷后腦組織中β-APP和MAP-2的表達(dá)變化規(guī)律，以期為法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中大致推斷顱腦損傷時(shí)間提供科學(xué)的參考依據(jù)。
　　 方法：采用Feeney's法建立大鼠腦挫傷模型。選取64只健康成年SD大鼠，雌雄不限，體重250±10g(由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=56)及對(duì)照組(n=8)，實(shí)驗(yàn)組依據(jù)損傷時(shí)間

2、不同再分為7個(gè)亞組。均實(shí)施麻醉后，實(shí)驗(yàn)組大鼠采用自由落體打擊法于顱骨中線(xiàn)旁3mm處造成腦挫傷模型，通過(guò)常規(guī)HE染色認(rèn)定損傷部位及損傷程度，對(duì)大鼠腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學(xué)改變、β-APP和MAP-2的分布特征進(jìn)行光鏡觀察，同時(shí)分別于損傷后1h、4h、12h、48h、72h、7d、14d七個(gè)時(shí)間點(diǎn)(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只)取挫傷處腦組織各100mg，置于液氮中保存?zhèn)溆茫粚?duì)照組大鼠未打擊造傷，其余處理與實(shí)驗(yàn)組相同。應(yīng)用免疫組化SABC法、

3、免疫印跡Western blot法從蛋白水平觀察腦挫傷后β-APP、MAP-2的時(shí)序性變化，結(jié)合圖像分析技術(shù)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析進(jìn)行結(jié)果分析；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)并結(jié)合圖像分析技術(shù)從核酸水平定量半檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組動(dòng)物的各腦組織β-APP、MAP-2mRNA的時(shí)序性變化，觀察上述指標(biāo)與損傷時(shí)間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：三種方法統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：(1)大鼠腦挫傷后β-APP在腦組織中的表達(dá)于傷后12h達(dá)到峰值，隨后陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞逐漸減少

4、，7d后仍有少量表達(dá)但仍高于對(duì)照組，14d后表達(dá)基本恢復(fù)至接近對(duì)照組水平；(2)MAP-2于腦挫傷后1h表達(dá)明顯丟失，4h后蛋白丟失達(dá)到高峰，12h蛋白開(kāi)始部分恢復(fù)表達(dá)，48h蛋白量逐漸增多，14d蛋白表達(dá)達(dá)到高峰。
　　 結(jié)論：大鼠腦挫傷后腦組織中β-APP和MAP-2表達(dá)隨著損傷時(shí)間呈規(guī)律性變化，有望用于法醫(yī)學(xué)鑒定及早期法醫(yī)學(xué)損傷時(shí)間推斷。免疫組化技術(shù)操作簡(jiǎn)單且易行，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)分子水平的變化敏感而且精確