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文檔簡介
1、子癇前期(preeclampsia,PE)是妊娠期特有的疾病,是妊娠期高血壓疾病最常見的類型。流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)病率在我國約為9.4%-10.4%,國外報道其發(fā)病率為7%-12%。盡管圍產(chǎn)保健技術(shù)不斷進步,該病仍嚴重影響母兒健康,是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍生兒病率及死亡率增加的主要原因之一。盡管國內(nèi)外學(xué)者對其病因及發(fā)病機制做了大量的研究,目前子癇前期的發(fā)病機制不明確,尚未發(fā)現(xiàn)明確單一致病因素,系多因素綜合作用所致。膜聯(lián)蛋白(annexins)是
2、一種非常古老而又廣泛存在的蛋白,是一種以鈣離子依賴性方式與酸性磷脂結(jié)合的蛋白質(zhì)。大量的研究顯示,膜聯(lián)蛋白在胞吞、胞吐作用、細胞間以及細胞與細胞外基質(zhì)間的相互作用、離子通道的形成等多種生理過程中起作用。研究發(fā)現(xiàn),某些疾病的發(fā)生與膜聯(lián)蛋白家族在細胞中的表達密切相關(guān)。在annexin家族中,annexin A2和annexinA5與凝血-纖溶密切相關(guān)。長期以來,研究發(fā)現(xiàn)annexin A2和annexin A5與不良妊娠結(jié)局如復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、抗磷
3、脂綜合癥的胎盤變化密切相關(guān),但其與子癇前期的關(guān)系尚缺乏深入研究。
第一部分缺氧條件下滋養(yǎng)細胞的生長及胎盤滋養(yǎng)細胞凋亡和病理檢測
目的:研究體內(nèi)外缺氧環(huán)境對滋養(yǎng)細胞在生長、凋亡的影響及對胎盤的影響。
方法:采用缺氧培養(yǎng)技術(shù)檢測體外缺氧情況下滋養(yǎng)細胞的生長。通過流式細胞術(shù)檢測體內(nèi)缺氧情況下(子癇前期患者體內(nèi)的缺氧狀態(tài))滋養(yǎng)細胞的凋亡。同時通過HE染色檢測子癇前期患者胎盤組織的病理變化。
4、 結(jié)果:
1 體外滋養(yǎng)細胞缺氧狀態(tài)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),隨著缺氧時間的延長,滋養(yǎng)細胞生長受限,膜聯(lián)蛋白表達水平下調(diào)。
2 流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),子癇前期(體內(nèi)缺氧情況下),滋養(yǎng)細胞凋亡尤其是早期凋亡發(fā)生改變:早發(fā)型輕度子癇前期組為3.21%,早發(fā)型子癇重度前期組為5.32%,晚發(fā)型輕度子癇前期組為2.43%,晚發(fā)型重度子癇前期組為4.28%,正常妊娠組為1.05%。
3 在正常妊娠者的胎盤組織中未發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)微
5、血栓的形成。而在子癇前期患者胎盤組織中可以見到胎盤血管內(nèi)微血栓的形成,且隨著病情程度的加重,微血栓形成逐漸增多。
結(jié)論:缺氧情況下,體外滋養(yǎng)細胞生長受限;體內(nèi)滋養(yǎng)細胞(胎盤滋養(yǎng)細胞)凋亡尤其是早期凋亡明顯增加。同時,子癇前期患者胎盤組織血管中可見微血栓形成。
第二部分膜聯(lián)蛋白A5在子癇前期患者體內(nèi)的表達
目的:探討膜聯(lián)蛋白A5(annexirtA5)在子癇前期及正常妊娠孕婦外周血及胎盤組織中的表
6、達及其與子癇前期發(fā)病的關(guān)系。
方法:選擇2007年12月-2009年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院分娩患者早發(fā)型子癇前期(輕度、重度)、晚發(fā)型子癇前期(輕度、重度)及健康妊娠孕婦各30例,共150例,收集其外周血及胎盤組織,應(yīng)用免疫組化研究annexin A5在胎盤組織中的定位、應(yīng)用Western blot、RT-PCR測定患者外周血及胎盤組織中annexin A5的表達。
結(jié)果:
1 通過免
7、疫組化檢測發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)主要在胎盤滋養(yǎng)細胞表面高表達。與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細胞表面annexin A5染色減少。
2 通過Western blot檢測子癇前期患者胎盤組織及外周血中annexinA5的表達水平。胎盤組織及外周血中annexin A5水平:早發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.54±0.12及0.62±0.17,早發(fā)型重度子癇前期組分別為0.47±0.15及0.56±0.2
8、4,晚發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.74±0.23及1.08±0.32,晚發(fā)型重度子癇前期組分別為0.68±0.28及0.72±0.21,正常妊娠組分別為1.73±0.35及1.55±0.27。與正常妊娠相比,子癇前期患者組織中的膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)表達明顯減少。
3 通過RT-PCR技術(shù)檢測胎盤組織中annexin A5 mRNA的表達水平:早發(fā)型輕度子癇前期組為25.0±3.04,早發(fā)型重度子癇前期組為2
9、4.8±2.96,晚發(fā)型輕度子癇前期組為25.4±3.92,晚發(fā)型重度子癇前期組為25.1±2.74,正常妊娠組為30.6±2.68。
結(jié)論:通過免疫組化和Western blot檢測發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)主要在胎盤滋養(yǎng)細胞表面高表達,與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細胞annexin A5表達下調(diào),可能影響胎盤凝血.纖溶系統(tǒng),促使子癇前期患者高凝狀態(tài)的形成,與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
10、 第三部分膜聯(lián)蛋白A2在子癇前期患者體內(nèi)的表達
目的:探討膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2)在子癇前期及正常妊娠孕婦外周血及胎盤組織中的表達及其與子癇前期發(fā)病的關(guān)系。
方法:選擇2007年12月-2009年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院分娩患者早發(fā)型子癇前期(輕度、重度)、晚發(fā)型子癇前期(輕度、重度)及健康妊娠組患者各30例,共150例,收集其外周血及胎盤組織,應(yīng)用免疫組化研究armexin A2在胎盤
11、組織中的定位、應(yīng)用Western blot、RT-PCR測定患者外周血及胎盤組織中annexinA2的表達。
結(jié)果:
1 通過免疫組化發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A2(Annexin A2)主要在胎盤滋養(yǎng)細胞表面高表達。與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細胞表面annexinA2染色減少。
2 通過Western blot檢測子癇前期患者胎盤組織及外周血中annexinA2的表達水平。胎盤組織及外周血中an
12、nexin A2水平:早發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.77±0.15及0.63±0.09,早發(fā)型重度子癇前期組分別為0.76±0.19及0.66±0.13,晚發(fā)型輕度子癇前期組分別為0.74±0.23及0.71±0.23,晚發(fā)型重度子癇前期組分別為0.81±0.35及0.59±0.14,正常妊娠組分別為1.82±0.18及0.50±0.04。與正常妊娠相比,子癇前期患者組織中的膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2)表達明顯減少。
13、 3 通過RT-PCR技術(shù)檢測胎盤組織中annexin A2 mRNA的表達水平:早發(fā)型輕度子癇前期組為27.94±1.49,早發(fā)型重度子癇前期組為27.23±1.26,晚發(fā)型輕度子癇前期組為28.27±0.85,晚發(fā)型重度子癇前期組為28.54±0.65,正常妊娠組為32.34±0.71。
結(jié)論:
通過免疫組化和Western blot發(fā)現(xiàn),膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2)主要在胎盤滋養(yǎng)細胞表面高表達
14、,與正常妊娠相比,子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細胞annexin A2表達下調(diào),抑制了子癇前期患者的纖溶系統(tǒng),促使子癇前期患者體內(nèi)高凝狀態(tài)的形成,與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
第四部分胎盤組織膜聯(lián)蛋白A5提取純化和體外抗凝試驗
目的:探討體內(nèi)及體外膜聯(lián)蛋白A5(annexin A5)的抗凝作用及其對體內(nèi)凝血系統(tǒng)的影響。
方法:選擇2007年12月-2009年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院分娩健康妊娠者
15、,收集其胎盤組織進行annexin A5提純。通過體外實驗測定不同濃度annexin A5對凝血系統(tǒng)的影響。同時收集子癇前期組及正常妊娠組患者的外周血,測定凝血功能。
結(jié)果:
1.當(dāng)annexin A5的濃度≥30μg/ml時,APTT逐漸延長,各組間有統(tǒng)計學(xué)差異并呈梯度性依賴性增加。
2.與正常妊娠組比較,子癇前期患者外周凝血功能檢測未見明顯差異,但D-Dimmer升高。
結(jié)論:
16、Annexin A5的抗凝活性同其濃度密切相關(guān)。當(dāng)annexin A5濃度≥30μg/ml,APTT與annexin A5濃度呈依賴性相關(guān)。隨著annexin A5濃度增加,APTT逐漸延長。子癇前期患者外周血的APTT未見明顯變化,但D-Dimmer升高。
第五部分相關(guān)抗體的檢測及分析
目的:檢測子癇前期及正常妊娠孕婦外周血中的相關(guān)抗體,并分析其在子癇前期發(fā)病機制中的作用。
方法:應(yīng)用ELIS
17、A方法檢測子癇前期及正常妊娠孕婦外周血中的anti-annexin A5、anti-annexin.A2、anti-β2GPI、ACL水平。
結(jié)果:
1 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中anti-annexin A5水平增加,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.83)。
2 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中anti-annexin A2水平增加,且具有顯著性差異(P=0.02)。但子癇前期各組之間,
18、早發(fā)型子癇前期高于晚發(fā)型子癇前期,重度子癇前期高于輕度子癇前期,但各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.69)。
3 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中anti-β2GPI水平增加,且具有顯著性差異(P=0.04)。但子癇前期各組之間,早發(fā)型子癇前期高于晚發(fā)型子癇前期,重度子癇前期高于輕度子癇前期,但各組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.79)。
4 與正常妊娠相比,子癇前期患者外周血中ACL陽性率增加。
結(jié)
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