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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:克隆鼠IFN-λ2基因,構(gòu)建其腺病毒載體,獲取病毒重組子,并研究其生物學(xué)活性。
方法:用人水皰口炎病毒VSV(vesicular stomatovirus)病毒誘導(dǎo)小鼠原代脾細(xì)胞表達(dá)IFN-λ2,通過RT-PCR獲取IFN-λ2 cDNA,將其亞克隆至pShuttle-CMV載體,經(jīng)Pme I線性化后,與腺病毒的骨架載體pAdEasy在BJ5183菌中同源重組,293A細(xì)胞包裝擴(kuò)增,免疫熒光、Western blot
2、檢測(cè)mIFN-λ2蛋白的表達(dá)。mIFN-λ2對(duì)鼠肺腺癌細(xì)胞LA795的抑制作用,通過MTT細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)檢測(cè)活性。
結(jié)果:獲取鼠IFN-λ2的cDNA,序列與GeneBank公布序列完全一致,成功構(gòu)建腺病毒載體;MTT法研究Ad-mIFN-λ2和Ad-Lacz對(duì)小鼠肺腺癌細(xì)胞LA795的體外抑制作用,結(jié)果顯示mIFN-λ2對(duì)LA795細(xì)胞生長(zhǎng)具有一定的抑制作用。
結(jié)論:成功構(gòu)建mIFN-λ2的重組腺病毒載體,其
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