IL-8、IL-12對白色念珠菌SAP2和SAP5表達的影響.pdf

1、白色念珠菌(Candida albicans,C.albicans)是最重要的人類機會致病真菌，通過三條途徑致病：①從酵母相向菌絲相進行形態(tài)轉(zhuǎn)化增加粘附和侵入宿主細胞的能力；②產(chǎn)生與菌絲相關(guān)的因子如粘附分子、侵襲素樣分子和分泌性水解酶侵襲宿主細胞；③逃避宿主的免疫應(yīng)答。分泌性天冬氨酸蛋白酶(secreted aspartyl proteinase，Sap)是研究得非常廣泛的白色念珠菌毒力因子，由SAP基因家族編碼，與白色念珠菌的三條致病

2、途徑密切相關(guān)。IL-8、IL-12在宿主抗白色念珠菌感染中具有保護作用，有文獻報道Sap可刺激細胞因子產(chǎn)生，增強宿主的細胞免疫應(yīng)答能力，然而，細胞因子增加對SAP基因表達的影響有待進一步研究。
　　 目的：
　　 本課題擬建立三株白色念珠菌(SC5314、3630、3683)感染牙齦上皮細胞的體外模型；分析念珠菌經(jīng)牙齦上皮細胞誘導(dǎo)后SAP2、SAP5的表達情況及其差異；初步探討IL-8、IL-12對SAP2、SAP5表達

3、的作用，為白色念珠菌的免疫治療提供理論支持和方法指導(dǎo)。
　　 材料和方法
　　 收集30歲以內(nèi)健康成人志愿者阻生牙拔除術(shù)中切取的牙齦進行上皮細胞培養(yǎng)，一代細胞計數(shù)，按2×105/孔接種于12孔板中培養(yǎng)過夜。分別培養(yǎng)SC5314、3630、3683三株白色念珠菌，計數(shù)，按2×106/孔加入上皮細胞孔板中(即白色念珠菌：上皮細胞=10∶1)，調(diào)整孔內(nèi)培養(yǎng)基量至1.5mL。對照組為單獨培養(yǎng)的白色念珠菌。在共培養(yǎng)的孔中，分別加入

4、IL-8(3500pg/mL、7000pg/mL)、IL-12(500pg/mL、1000pg/mL)，對照組為不加細胞因子共培養(yǎng)的白色念珠菌。24h、48h時收集樣本，1500r/min離心10分鐘，沉淀物貯存于-80℃，熒光定量PCR檢測SAP2、SAP5mRNA的表達量。采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，結(jié)果用((-x)±s)表示，(-x)＜0.001認為表達量極低，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果

5、>　　 1.三株菌株共培養(yǎng)時SAP2、SAP5的表達量顯著高于單獨培養(yǎng)(P＜0.01)。
　　 2.3683SAP2和SAP5的表達量高于SC5314和3630(P＜0.05)。
　　 3.三株菌株與上皮細胞共培養(yǎng)24h、48h時，SAP5的表達量均顯著高于SAP2(P=0.000)。
　　 4.IL-8對三株菌株SAP2和SAP5均有抑制作用(P＜0.05)，48h時幾乎可完全抑制兩基因的表達(P＜0.01)

6、，3500pg/mL和7000pg/mL的IL-8之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 5.在48h時，500pg/mL的IL-12可有效抑制三株念珠菌SAP2的表達(P＜0.01)。
　　 結(jié)論
　　 1、雖然SAP2和SAP5均是白色念珠菌的致病因子，本研究結(jié)果表明后者表達量明顯高于前者，提示SAP5在對口腔上皮細胞侵襲中的作用可能要強于SAP2。
　　 2、白色念珠菌株3683具有很強的口腔黏