黃連、生地及其配伍對2型糖尿病大鼠治療作用及機(jī)制的比較研究.pdf

1、目的：
　　 觀察比較黃連、生地及其配伍對2 型糖尿病大鼠胰島素抵抗（IR）和胰島β細(xì)胞功能的影響，探討黃連、生地及其配伍治療2 型糖尿病的作用機(jī)制，并比較黃連配伍生地在作用靶點上是否具有選擇性或協(xié)同性，揭示黃連丸方劑配伍的科學(xué)內(nèi)涵。
　　 方法：
　　 采用高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（STZ）尾靜脈注射的方法誘導(dǎo)SD 大鼠，建立2 型糖尿病動物模型，將模型動物隨機(jī)分為黃連組、生地組、黃連+生地組、羅格列酮

2、組及模型組，分別給予相應(yīng)藥物進(jìn)行干預(yù)，另設(shè)正常對照組。干預(yù)4周后各組大鼠行口服糖耐量試驗（OGTT）和胰島素釋放試驗（IRT），收集各組空腹、30min、60min、120min、180min 血清標(biāo)本，用放免法檢測血清胰島素含量，用葡萄糖氧化酶法檢測血清葡萄糖濃度，并繪制各組OGTT 曲線圖，計算各組胰島素曲線下面積（INSAUC）和胰島素敏感指數(shù)（ISI）。行IRT后，將各組大鼠處死，收集血清和胰腺組織標(biāo)本，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELI

3、SA）檢測腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素1βIL-1β）、白介素6（IL-6）水平，用酶法檢測甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），用銅離子還原法檢測游離脂肪酸（FFA）濃度，用免疫組化法檢測胰腺組織胰島素分泌表達(dá)，計算平均光密度值（MOD），用原位缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測胰島細(xì)胞凋亡情況，計算凋亡率，用透射電鏡觀察胰島β細(xì)胞分泌情況。
　　 結(jié)果：

4、
　　 一.黃連、生地及其配伍對2 型糖尿病大鼠OGTT、INSAUC和ISI的影響與正常組比較，模型組各時間點血糖均顯著升高，INSAUC 顯著減小，ISI 顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組各時間點血糖均顯著降低，INSAUC 顯著增加，ISI 顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與黃連+生地復(fù)方組比較，黃連、生地各單藥組各時間點血糖水平均顯著高于復(fù)方組，INSAUC顯著小于復(fù)方組，I

5、SI 顯著低于復(fù)方組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　 二.黃連、生地及其配伍對2 型糖尿病大鼠血清TG、TC、LDL-C 及HDL-C的影響與正常組比較，模型組血清TG、TC、LDL-C 顯著升高，HDL-C 顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組血清TG、TC、LDL-C 顯著降低，HDL-C顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與黃連+生地復(fù)方組比較，黃連、生地各單藥組血清TG、T

6、C、LDL-C 顯著高于復(fù)方組，HDL-C 顯著低于復(fù)方組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　 三.黃連、生地及其配伍對2 型糖尿病大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA的影響與正常組比較，模型組血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA 顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA均顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與黃連+生地復(fù)方組

7、比較，黃連、生地各單藥組血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA 均顯著高于復(fù)方組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　 四.黃連、生地及其配伍對2 型糖尿病大鼠胰島素表達(dá)分泌和胰島細(xì)胞凋亡的影響陽性反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色。正常組陽性反應(yīng)產(chǎn)物，排列緊密，數(shù)量多，染色深；
　　 模型組陽性反應(yīng)產(chǎn)物，顯著減少，染色淺；各治療組陽性反應(yīng)產(chǎn)物排列稀疏，數(shù)量顯著增多，染色深。與正常組比較，模型組的MOD 顯著減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意

8、義（P＜0.05）；與模型組比較，各治療組的MOD 顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；
　　 與黃連+生地復(fù)方組比較，黃連、生地各單藥組MOD 顯著低于復(fù)方組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 正常細(xì)胞細(xì)胞核標(biāo)記為藍(lán)色，凋亡細(xì)胞細(xì)胞核標(biāo)記為深紅棕色。與正常組比較，模型組細(xì)胞凋亡率顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各治療組細(xì)胞凋亡率顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與黃連

9、+生地復(fù)方組比較，黃連、生地各單藥組細(xì)胞凋亡率顯著高于復(fù)方組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 電鏡下正常組胰島β細(xì)胞細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，細(xì)胞漿內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體散在分布，結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有大量分泌顆粒，顆粒密集，顆粒呈圓形，外有界膜包繞，顆粒內(nèi)有電子密度不一的芯，芯為圓形或不規(guī)則形，界膜與芯之間有大小不一的空隙，明亮，清晰。模型組胰島β細(xì)胞細(xì)胞核縮小，不規(guī)則，核仁消失，染色質(zhì)聚集，線粒體無明顯腫脹，胞漿內(nèi)脂滴堆積，分泌

10、顆粒顯著減少，顆粒與芯之間的空隙增加，透亮度增加，有的界膜破裂，互相融合；黃連組胰島β細(xì)胞細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，核仁消失，染色質(zhì)向一側(cè)聚集，胞漿內(nèi)分泌顆粒數(shù)量增多，較少界膜破裂，互相融合；生地組胰島β細(xì)胞細(xì)胞核規(guī)則，核仁清晰，胞漿內(nèi)少量脂滴沉積，顆粒分布稀疏，分泌顆粒數(shù)量沒有明顯增多；黃連+生地組胰島β細(xì)胞細(xì)胞核規(guī)則，核仁清晰，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)，胞漿內(nèi)沒有脂滴沉積，顆粒分布密集，分泌顆粒數(shù)量明顯增多，顆粒增大，較少界膜破裂，互相融合；羅格列酮

11、組胰島β細(xì)胞細(xì)胞核呈圓形，胞漿內(nèi)顆粒分布密集，顆粒較小，芯為圓形，界膜與芯之間空隙較小，沒有界膜破裂，互相融合。
　　 結(jié)論：
　　 1 黃連、生地及其配伍對2 型糖尿病大鼠都有一定的治療作用，以黃連生地配伍組治療效果最佳。
　　 2 黃連、生地及其配伍治療2 型糖尿病有效的機(jī)制在于降低炎性細(xì)胞因子改善胰島素抵抗和抑制細(xì)胞凋亡保護(hù)β細(xì)胞。
　　 3 黃連配伍生地在降低炎性細(xì)胞因子和抑制細(xì)胞凋亡這兩個環(huán)節(jié)上