小白菜游離小孢子培養(yǎng)體系的構(gòu)建與利用.pdf

1、以17個(gè)小白菜品種為試材，采用游離小孢子培養(yǎng)方法，研究了胚狀體發(fā)生和發(fā)育、植株再生、再生植株繼代及生根的影響因素，探討了小孢子植株倍性鑒定方法。獲得的雙單倍體植株自交得到DH系，對(duì)DH系及其雜交組合的園藝學(xué)性狀進(jìn)行了鑒定，旨在建立高效的小白菜游離小孢子培養(yǎng)體系，并將其應(yīng)用于優(yōu)勢(shì)雜交育種實(shí)踐，加快育種進(jìn)程。研究結(jié)果如下： 1．確定了小白菜游離小孢子培養(yǎng)的適宜取樣時(shí)期?；ɡ傩螒B(tài)特征與小孢子發(fā)育時(shí)期之間的關(guān)系分析表明，花蕾長2.0-3

2、.49 mm，花瓣/花藥為1/2-5/4時(shí)，單核中晚期小孢子比例在75％以上。此時(shí)，最適合進(jìn)行小孢子培養(yǎng)。 2．不同基因型試材小孢子胚胎發(fā)生能力有很大差異。在17個(gè)品種中有15個(gè)誘導(dǎo)獲得了胚狀體，占供試材料的88.24％。其中，小白菜品種“菜園”的出胚率達(dá)到244胚/30蕾。 3．較低的離子濃度有利于小白菜胚狀體誘導(dǎo)。利用大量元素減半的1/2 NLN-13培養(yǎng)基不僅擴(kuò)大了出胚基因型，而且胚狀體誘導(dǎo)率得到了很大提高。

3、 4．6-BA和NAA對(duì)小孢子胚狀體發(fā)生和發(fā)育有一定影響。適宜的濃度配比為“6-BA0.05+NAA 0.1 mg·L<'-1>”和“6-BA 0.05+NAA 0.2 mg·L<'-1>”。 5．培養(yǎng)基中添加適量的瓊脂糖和活性炭對(duì)誘導(dǎo)胚狀體發(fā)生及發(fā)育有促進(jìn)作用，適宜添加量為25 mg·L<'-1>瓊脂糖和0.5 g·L<'-1>活性炭。 6．花蕾4℃低溫預(yù)處理能提高小孢子胚誘導(dǎo)率，以處理24 h的效果最好?；ɡ俚蜏仡A(yù)

4、處理還有暫時(shí)保存材料而使其不降低培養(yǎng)效果的作用。 7．游離小孢子培養(yǎng)初期33℃高溫預(yù)處理對(duì)小孢子胚胎發(fā)生是必要的，處理時(shí)間以24 h為宜。 8．胚狀體發(fā)育時(shí)期對(duì)胚成苗能力有很大影響，子葉期是將胚狀體轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上的適宜時(shí)期。 9．誘導(dǎo)胚狀體成苗的適宜培養(yǎng)基為“MS+3％蔗糖+1.0％瓊脂+100 mg·L<'-1>活性炭”，成活率達(dá)88.70％。 10．“MS+3％蔗糖+0.8％瓊脂”是小孢子植株繼代

5、和復(fù)壯培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基。“1/2MS+NAA0.1 mg·L<'-1>+3％蔗糖+0.8％瓊脂”和“MS+NAA0.1 mg·L<'-1>+3％蔗糖+0.8％瓊脂”是小孢子植株生根的適宜培養(yǎng)基。 11．小孢子植株倍性鑒定可以采用染色體計(jì)數(shù)的直接鑒定法和比較形態(tài)學(xué)、氣孔特征及花粉活力的間接鑒定法相結(jié)合的方法。最后還可以用自交結(jié)籽能力進(jìn)行驗(yàn)證。 12．從不同品種中誘導(dǎo)出的小孢子植株單倍體、雙單倍體、高倍體和嵌合體比例不同。其