黑線倉鼠哈氏腺SS及GnRH表達(dá)模式初探.pdf

1、季節(jié)性繁殖是黑線倉鼠（Cricetulus barabensis）對溫帶生態(tài)因子季節(jié)變化的適應(yīng)機(jī)制之一，也是造成其種群數(shù)量波動的重要因素。研究闡明黑線倉鼠繁殖調(diào)控的分子機(jī)制有利于制定科學(xué)高效的綜合措施預(yù)防和控制鼠害，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　哈氏腺（Harderian gland,HG）亦稱瞬膜深部第三眼瞼腺，廣泛分布在眼眶內(nèi)側(cè)。在形態(tài)上，哈氏腺存在明顯的物種差異，不同發(fā)育時期其形態(tài)也有所差異，有些物種還具有明顯的性別二態(tài)性特征。

2、在功能上，哈氏腺被認(rèn)為是目前未能徹底證實(shí)功能的，廣泛分布在脊椎動物體內(nèi)的最后的大型結(jié)構(gòu)。其功能除了分泌粘液，潤滑眼球外，還可能涉及免疫、感光保護(hù)器以及體溫調(diào)節(jié)等。已有研究證實(shí)哈氏腺具有感光作用，且其生理活動受神經(jīng)-體液的雙重調(diào)控。HG與松果體在功能、產(chǎn)物成分上有較多相似之處，例如在二者中都檢出了褪黑素及其受體、生長抑素。HG可能作為松果體的“候補(bǔ)”結(jié)構(gòu)，參與視網(wǎng)膜-松果體軸的組成，因此可能是調(diào)控季節(jié)性繁殖的重要靶器官。
　　生長抑

3、素（somatostatin, SS）能夠影響催乳素(PRL)、促性腺激素（LH、FSH）等的分泌，同時 SS能夠通過抑制下丘腦GnRH的釋放，間接影響子宮生理功能。因此， SS可能與GnRH共同參與了動物的生殖功能調(diào)控。然而，黑線倉鼠哈氏腺內(nèi)是否有SS的表達(dá)，其表達(dá)模式是否與GnRH有關(guān)，都尚未見報(bào)道。
　　鑒于HG結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且功能及其調(diào)控機(jī)制不清，在本實(shí)驗(yàn)室前期研究克隆黑線倉鼠GnRH部分序列的基礎(chǔ)上，初步探究了黑線倉鼠 HG

4、形態(tài)組織結(jié)構(gòu)特征，通過RT-PCR克隆哈氏腺SS基因序列，并利用實(shí)時熒光定量PCR方法探究HG中SS與GnRH的基因表達(dá)模式。
　　形態(tài)學(xué)觀察和測量表明：黑線倉鼠HG為淺粉色，呈扁啞鈴型，兩眼球相對的一側(cè)較小，外側(cè)較大；長度與重量隨年齡而變化，不同季節(jié)條件下，長度、重量也有差異。石蠟切片、HE染色的組織學(xué)研究表明：黑線倉鼠HG為復(fù)管泡腺，鏡下明顯看到腺體外有一層結(jié)締組織被膜，被膜延伸將腺體分為許多小葉。每一小葉含較多腺泡，腺泡由圓

5、柱形或錐體形上皮細(xì)胞圍成大小不一的孔腔；導(dǎo)管深入實(shí)質(zhì)部分，有的腺腔內(nèi)填充有內(nèi)容物。形態(tài)及組織學(xué)的研究結(jié)果提示哈氏腺功能的活躍性和復(fù)雜性。
　　采用RT-PCR方法克隆測序得到HGSS cDNA序列489bp，注冊于Genbank，登錄號為：KF318861。該序列包括完整編碼區(qū)序列351bp，編碼116個氨基酸。14個氨基酸殘基構(gòu)成SS-14肽，其中Phe6，7，11、Trp8形成疏水區(qū)，影響分子構(gòu)象活性，其他氨基酸維持該肽環(huán)形結(jié)

6、構(gòu)。利用該基因序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，結(jié)果顯示：黑線倉鼠與大、小鼠的親源關(guān)系最近，與原雞、非洲爪蟾、斑馬魚等親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，這與傳統(tǒng)分類結(jié)果一致，說明該基因結(jié)構(gòu)相對保守。
　　應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，檢測不同發(fā)育時期(亞成年期、成年發(fā)情期、老年期)、不同季節(jié)（春、夏、秋、冬）黑線倉鼠哈氏腺中SS、GnRH的相對表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SS、GnRH在不同發(fā)育時期HG中的相對表達(dá)模式，呈現(xiàn)出老年期<成年期<亞成年期的規(guī)律，雌雄皆然。GnR

7、H在不同發(fā)育時期的相對表達(dá)模式與在下丘腦中的研究結(jié)果也相一致，說明可能與黑線倉鼠的繁殖調(diào)控有一定聯(lián)系。不同季節(jié)發(fā)情期黑線倉鼠HG中SS與GnRH的相對表達(dá)，結(jié)果顯示SS與GnRH春秋季的表達(dá)量低于夏冬兩季。由于春秋季是黑線倉鼠的繁殖高峰季，提示SS、GnRH可能與黑線倉鼠的季節(jié)性繁殖調(diào)控有關(guān)。
　　以上研究結(jié)果為后續(xù)研究SS、GnRH在黑線倉鼠中的功能與分子調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為探究黑線倉鼠HG的功能提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)，也為農(nóng)田鼠害科學(xué)