厄貝沙坦調(diào)節(jié)動脈粥樣硬化相關(guān)炎性因子及血管發(fā)生因子的研究.pdf

1、第一部分 背景和目的:
　　血管緊張素受體拮抗劑（ARB）耐受性好，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于降壓治療。但是，部分臨床研究提示服用ARBs的患者心肌梗死的風(fēng)險增加，對于兩類RAAS阻斷藥物（ACEI和ARB）來說，ARBs并非是最佳選擇。有學(xué)者推斷，ARB類藥物有可能增加心腦血管事件的發(fā)生與AT2R的過度激活有關(guān)，阻斷了AT1R，則AT2R發(fā)揮主要作用，從而抵消了AT1R阻斷的有利作用。
　　血管發(fā)生研究也是當(dāng)今研究ARB類藥非降壓效應(yīng)

2、的存有爭議的一個方面，目前的研究表明，血管發(fā)生也促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，有研究發(fā)現(xiàn)，AT2介導(dǎo)了血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）通路的激活，從而發(fā)揮促血管生成的效應(yīng)。
　　我們探討了血管緊張素受體拮抗劑（ARB）與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）兩類藥物在老年男性高血壓人群中的應(yīng)用對心腦血管事件獲益的對比,同時在細(xì)胞水平探討了厄貝沙坦干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系EA.hy926的生物學(xué)效應(yīng)、全基因組表達(dá)譜，著重分析了厄貝沙坦干預(yù)人臍靜

3、脈內(nèi)皮細(xì)胞后動脈粥樣硬化相關(guān)炎性因子及血管發(fā)生因子的表達(dá)變化，并在分子機(jī)制上進(jìn)行了研究。
　　方法:
　　回顧性分析2007年1月至2011年5月因高血壓病服用ACEI類或ARB類大于等于2個月的老年男性患者933例，設(shè)定主要終點(diǎn)事件及次要終點(diǎn)事件對比兩類藥物對心腦血管發(fā)生事件的影響。
　　EA.hy926細(xì)胞與不同濃度組厄貝沙坦共同孵育24h，觀察細(xì)胞形態(tài)及凋亡、增殖等生物學(xué)效應(yīng)及VEGFmRNA和SELPmRNA的

4、表達(dá)，選出最適濃度進(jìn)行全人類基因表達(dá)譜變化。應(yīng)用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)及免疫印記驗證重點(diǎn)炎癥、血管發(fā)生相關(guān)差異表達(dá)基因。
　　設(shè)計AngII刺激EA.hy926細(xì)胞系的模型，分為6組，分別為空白組、AngII刺激組、AngII刺激+AT1R阻滯劑組、AngII刺激+AT2R阻滯劑組、AngII刺激+雙阻滯劑組、AngII刺激+NF-κBp65阻滯劑組。觀察用不同阻滯劑阻滯條件下，NF-κBp65以及下游炎癥因子和血管發(fā)生因子的相應(yīng)變

5、化，試圖闡明厄貝沙坦干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系EA.hy926后炎性因子和血管發(fā)生相關(guān)因子改變的分子機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　年齡、藥物類型（服用ARB）、合并腦梗塞及腎功能不全病史是影響主要終點(diǎn)事件發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測因素，其中服用ARB組發(fā)生主要終點(diǎn)事件的風(fēng)險大于服用ACEI組。次要終點(diǎn)事件的發(fā)生在兩組沒有明顯的差異，年齡、合并冠心病史是影響次要終點(diǎn)事件的獨(dú)立預(yù)測因素。
　　厄貝沙坦促進(jìn)EA.hy926細(xì)胞增殖，不誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

6、。在一定濃度范圍內(nèi)明顯增加VEGFmRNA及SELPmRNA的表達(dá)。疾病分類分析及聚類分析分析厄貝沙坦干預(yù)EA.hy926細(xì)胞基因表達(dá)譜中的差異基因，發(fā)現(xiàn)與動脈粥樣硬化相關(guān)炎性及血管發(fā)生因子的表達(dá)趨勢促進(jìn)血管發(fā)生及動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。
　　AngII刺激EA.hy926細(xì)胞模型中，相比空白組，PTGS2(COX2),MMP2，VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)在AngII刺激組及AngII刺激+AT1R阻滯劑組和AngII刺激+A

7、T2R阻滯劑組均增高，其中，AngII刺激組增高最為明顯，只有AngII刺激+雙阻滯劑組、AngII刺激+NF-κBp65阻滯劑組較空白組能夠明顯減低COX2、MMP2，VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)（P<0.05）。NF-κBp65的蛋白表達(dá)也遵循以上規(guī)律。
　　結(jié)論:
　　ACEI比ARB類藥物更能有效的減少心腦血管事件的發(fā)生，在老年高血壓人群中在初次選擇ACEI和ARB中，建議優(yōu)先考慮ACEI類藥物。
　　厄貝沙坦

8、促進(jìn)EA.hy926細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)動脈粥樣硬化相關(guān)炎性因子以及血管發(fā)生因子的表達(dá)。EA.hy926細(xì)胞上存在豐富的AT1R和AT2R。AngII主要通過AT1R和AT2R兩種受體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。經(jīng)典NF-κB途徑是AT1R和AT2R的共同通路，厄貝沙坦調(diào)節(jié)動脈粥樣硬化相關(guān)炎性因子以及血管發(fā)生因子的表達(dá)效應(yīng)主要依賴于AT2R激活其下游的NF-κB通路，進(jìn)而進(jìn)行炎性因子和血管發(fā)生因子的調(diào)節(jié)。
　　第二部分
　　背景和目的:

9、>　　血管緊張素受體拮抗劑（angiotensinreceptorblockers,ARB）耐受性好，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于降壓治療。許多證據(jù)也證實(shí)ARB降壓以外的臨床受益，譬如改善左室重構(gòu)、延緩糖尿病腎病的進(jìn)展，降低腦卒中發(fā)病率等。但是，部分臨床研究提示服用ARBs的患者心肌梗死的風(fēng)險增加，對于兩類RAAS阻斷藥物（ACEI和ARB）來說，ARBs并非是最佳選擇。自從2004年BMJ雜志上Verma和Strauss匯總了多個大型的隨機(jī)對照試驗

10、提出ARB類藥物增加心肌梗死的風(fēng)險—病人應(yīng)當(dāng)被告知的觀點(diǎn)，到2011年ROADMAP研究也得出了在奧美沙坦推遲2型糖尿病人微量白蛋白尿產(chǎn)生的同時，致死性心血管事件奧美沙坦組高于安慰劑組的結(jié)論，這種爭論的存在就是我們研究的基礎(chǔ)。
　　因此，本章我們探討血管緊張素受體拮抗劑（ARB）與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）兩類藥物在老年男性高血壓人群中的應(yīng)用對心腦血管獲益是否等同及影響預(yù)后的相關(guān)因素。
　　對象和方法:
　　回

11、顧性分析2007年1月至2011年5月因高血壓病服用ACEI類或ARB類大于等于2個月的老年男性患者933例，主要終點(diǎn)是由心血管死亡、非致死性心肌梗死、非致死性卒中組成的復(fù)合心血管終點(diǎn)。次級終點(diǎn)是不穩(wěn)定性心絞痛，新發(fā)心房顫動和短暫性腦缺血發(fā)作。
　　結(jié)果:
　　年齡、藥物類型（服用ARB）、既往腦梗塞及腎功能不全病史是影響主要終點(diǎn)事件發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測因素，其中服用ARB組發(fā)生主要終點(diǎn)事件的風(fēng)險大于服用ACEI組（P=0.037

12、，OR=2.124，95％CI:1.048-4.306）。Kaplan-Meier法比較主要終點(diǎn)事件發(fā)生率ARB組大于ACEI組（P=0.04）。次要終點(diǎn)事件的發(fā)生在兩組沒有明顯的差異(P=0.137，OR=1.454，95%CI:0.888-2.380)，年齡、合并冠心病史是影響次要終點(diǎn)事件的獨(dú)立預(yù)測因素。
　　結(jié)論:
　　ACEI比ARB類藥物更能有效的減少心腦血管事件的發(fā)生，在老年高血壓人群中在初次選擇ACEI和ARB

13、中，應(yīng)該優(yōu)先考慮ACEI。
　　第三部分：
　　背景和目的：
　　從既往大型的臨床研究及我們前期的臨床病例回顧中得出這樣的結(jié)論，ARB類藥物對于心腦血管事件的發(fā)生至少保持中立，甚至有可能增加心腦血管事件的發(fā)生。心腦血管事件的發(fā)生本質(zhì)上是動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定，破裂，出血和血栓形成。目前研究證明，動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展與炎癥關(guān)系密切，炎癥細(xì)胞的聚集及炎性因子作用貫穿了動脈粥樣硬化斑塊的整個發(fā)展過程。
　　ARB類

14、藥物是AT1受體（AT1R）阻斷劑，有學(xué)者推斷，ARB類藥物有可能增加心腦血管事件的發(fā)生與AT2R的過度激活有關(guān)，阻斷AT1R，AT2R發(fā)揮主要作用引起動脈粥樣硬化不穩(wěn)定相關(guān)炎性因子的上調(diào)。AT2R的作用目前研究仍存有爭議，AT2R激活NF-κB途徑從而激活下游炎性因子已經(jīng)在腎小管上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、施萬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞得到驗證，目前，在心血管內(nèi)皮細(xì)胞研究中并不明確。
　　血管發(fā)生研究也是當(dāng)今研究ARB類藥非降壓效應(yīng)的存有爭議的一

15、個方面，血管新生在改善慢性缺血的心血管組織中有舉足輕重的作用，然而在動脈硬化斑塊基礎(chǔ)上的血管發(fā)生，會增加斑塊的脆性和不穩(wěn)定性，炎癥與內(nèi)膜血管的發(fā)生也是相輔相成、相互促進(jìn)的。有研究報道，血管發(fā)生與AT2R的激活也密切相關(guān)。
　　我們的目的是研究經(jīng)典血管緊張素受體拮抗劑厄貝沙坦干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株EA.hy926后動脈粥樣硬化及血管發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)水平，觀察是否有某些基因參與了動脈粥樣硬化的炎癥反應(yīng)以及血管發(fā)生效應(yīng)，并探究其AT2

16、R相關(guān)的細(xì)胞分子機(jī)制。
　　方法：
　　EA.hy926細(xì)胞與不同濃度組厄貝沙坦共同孵育24h，觀察細(xì)胞形態(tài)及凋亡、增殖等生物學(xué)效應(yīng)，選出最適濃度；全人類基因組芯片AffymetrixU133Plus2.0分析厄貝沙坦最適濃度干預(yù)后的基因表達(dá)譜變化。聚類分析對照組與厄貝沙坦干預(yù)組間血管發(fā)生及炎癥相關(guān)相關(guān)差異表達(dá)基因。應(yīng)用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)，免疫印記驗證重點(diǎn)炎癥、血管發(fā)生相關(guān)差異表達(dá)基因；驗證細(xì)胞系上AT1R與AT2R的存在

17、，設(shè)計AngII刺激EA.hy926細(xì)胞系的模型，分為6組，分別為空白組、AngII刺激組、AngII刺激+AT1R阻滯劑組、AngII刺激+AT2R阻滯劑組、AngII刺激+雙阻滯劑組、AngII刺激+NF-κBp65阻滯劑組。觀察用不同阻滯劑阻滯條件下，NF-κBp65以及下游炎性因子和血管發(fā)生因子的相應(yīng)變化，試圖闡明厄貝沙坦干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系EA.hy926后炎性因子和血管發(fā)生相關(guān)因子改變的分子機(jī)制。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x

18、±s）表示，采用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(analysisofvariance,ANOVA),組間兩兩比較采用SNK-q(student-newman-keuls，SNK-q)檢驗，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　倒置顯微鏡下觀察，10-2M厄貝沙坦明顯影響EA.hy926細(xì)胞形態(tài)、10-4-10-8M厄貝沙坦有促進(jìn)細(xì)胞增殖的趨勢，在10-4-10-6M范圍內(nèi)增殖效應(yīng)明顯（P<0.05）。

19、流式法分析各濃度組對細(xì)胞凋亡沒有影響。選擇10-6M為最適濃度干預(yù)AffymetrixU133Plus2.0基因芯片。厄貝沙坦10-6mol/L干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系EA.hy92624h芯片中2倍以上差異基因共56條，其中上調(diào)基因為39條，下調(diào)基因17條，將差異基因代入DAVID平臺，在疾病分析中關(guān)系最密切的是動脈粥樣硬化，聚類分析表明這些差異基因與血管發(fā)生，細(xì)胞外刺激，結(jié)合反應(yīng)和骨骼形態(tài)發(fā)生等相關(guān)。其中與動脈粥樣硬化炎癥相關(guān)的基因有

20、MMP2，PECAM-1，SELP，PTGS2（COX2），SELL，CYP1A1，MMRN1，HSPA1A，這些因子均與動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性相關(guān)。與血管發(fā)生相關(guān)的基因有VEGF，KDR，PTGS2，LMO2，ROBO4，PLXND1，COL5A1，這些因子的上調(diào)均促進(jìn)血管發(fā)生。AngII刺激EA.hy926細(xì)胞模型中，相比空白組，COX2,MMP2，VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)在AngII刺激組及AngII刺激+AT1R阻滯劑組

21、和AngII刺激+AT2R阻滯劑組均增高，其中，AngII刺激組增高最為明顯，只有AngII刺激+雙阻滯劑組、AngII刺激+NF-κBp65阻滯劑組較空白組能夠明顯減低COX2、MMP2，VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)（P<0.05）。NF-κBp65的蛋白表達(dá)也遵循以上規(guī)律。
　　結(jié)論:
　　厄貝沙坦促進(jìn)EA.hy926細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)動脈粥樣硬化相關(guān)炎癥因子以及血管發(fā)生因子的表達(dá)。EA.hy926細(xì)胞上存在豐富的AT1R和