大鼠腦損傷后載脂蛋白E表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、顱腦損傷是法醫(yī)實(shí)際工作中最重要的損傷和最常見的死因之一，也是國內(nèi)外法醫(yī)病理學(xué)研究的熱點(diǎn)。其中顱腦損傷的發(fā)生機(jī)制及腦損傷時(shí)間推斷，一直是神經(jīng)科學(xué)及法醫(yī)病理學(xué)的研究重點(diǎn)。尋找推斷腦損傷時(shí)間的實(shí)用性生物學(xué)指標(biāo)是法醫(yī)病理工作者一直致力解決的問題。已有專家利用免疫組化、原位雜交、圖像分析技術(shù)作了大量的動物實(shí)驗(yàn)研究；亦有學(xué)者利用這些實(shí)驗(yàn)方法做腦損傷時(shí)間推斷的應(yīng)用研究，但目前尚未找到可應(yīng)用于法醫(yī)檢案的切實(shí)可行的生物學(xué)指標(biāo)。 載脂蛋白E(Apo

2、lipoprotein E，apoE)是一種調(diào)節(jié)血漿脂質(zhì)代謝的載脂蛋白。ApoE是一種含有299個(gè)氨基酸的單鏈多肽糖蛋白(Mr34200)，主要存在于CM、VLDL和HDL中。人類ApoE主要在肝臟和腦組織合成，腦中ApoE的mRNA表達(dá)總量是肝臟的1/3，星形細(xì)胞是其主要合成部位。由于近年來的研究發(fā)現(xiàn)，apoE在腦損傷后的中樞神經(jīng)系統(tǒng)生長發(fā)育、成熟衰老和損傷修復(fù)過程中發(fā)揮重要作用，本實(shí)驗(yàn)采用改進(jìn)的Feeney's自由落體腦損傷模型裝置

3、復(fù)制大鼠局灶性閉合性腦損傷，通過免疫組織化學(xué)方法(SP法)和WesternBlotting方法，觀察大鼠腦損傷后皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)內(nèi)ApoE表達(dá)情況，分析外傷性腦損傷后ApoE蛋白的表達(dá)規(guī)律與腦損傷時(shí)間的關(guān)系，以期為腦損傷時(shí)間推斷尋找客觀指標(biāo)提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [目的]: 通過觀察大鼠腦損傷后不同時(shí)間腦內(nèi)apoE的表達(dá)變化，探討apoE蛋白的表達(dá)規(guī)律與腦損傷時(shí)間的關(guān)系，為腦損傷時(shí)間推斷的研究提供新的理論依據(jù)。 [方法

4、]: 選取45只SD大鼠，隨機(jī)分為正常對照組(2只)、假手術(shù)組(3只)和損傷組(每組5只)，其中損傷組采用改進(jìn)的Feeney's自由落體撞擊法建立大鼠腦損傷模型，于傷后不同時(shí)間(0.5h、2h、6h、12h、24h、3d、5d、7d)處死；假手術(shù)組于開顱術(shù)后24h處死；正常對照組大鼠直接處死。 1.HE染色：對各組樣本均進(jìn)行損傷周圍皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的HE染色，鏡下觀察各組標(biāo)本的形態(tài)學(xué)改變。 2.尼氏染色：對正常對照

5、組的樣本進(jìn)行海馬區(qū)的甲苯胺藍(lán)染色，鏡下觀察海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 3.免疫組織化學(xué)方法：對各組樣本進(jìn)行載脂蛋白E的免疫組化染色觀察；采用圖像分析系統(tǒng)對神經(jīng)元形態(tài)、免疫組化指標(biāo)進(jìn)行量化指標(biāo)測定。 4.Western Blotting方法：運(yùn)用western blot技術(shù)量化載脂蛋白E在各組標(biāo)本中的表達(dá)量，并與免疫組化結(jié)果進(jìn)行比較分析，比較二者表達(dá)量的變化及差異。 [結(jié)果]: 1.HE染色：可見明顯的腦

6、損傷，傷后6h損傷灶周圍開始見小血管及毛細(xì)血管擴(kuò)張，瘀血，組織水腫，傷后3d損傷灶內(nèi)可見神經(jīng)元消失；海馬區(qū)尼氏染色可見傷后6h可見神經(jīng)元腫脹，24小時(shí)達(dá)到高峰，隨后神經(jīng)元出現(xiàn)修復(fù)。 2.正常對照組海馬區(qū)尼氏染色：與HE染色結(jié)果相比，神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)元結(jié)構(gòu)更加清晰?？梢娔崾闲◇w為紫藍(lán)色，細(xì)胞核為藍(lán)色，染色背景為粉紅色。 3.免疫組織化學(xué)染色：正常對照組和假手術(shù)組：海馬區(qū)均未見有apoE陽性表達(dá)；損傷灶周圍皮質(zhì)區(qū)apoE陽性染

7、色無或僅見于少數(shù)AST胞漿。損傷組損傷周圍皮質(zhì)區(qū)在傷后0.5hAST開始出現(xiàn)apoE陽性表達(dá)，3d達(dá)高峰，隨后逐漸下降；海馬區(qū)錐體細(xì)胞也在傷后0.5h開始出現(xiàn)apoE陽性表達(dá)，但24h達(dá)高峰，隨后回落。 4.Western blotting方法：損傷組可見0.5h開始出現(xiàn)apoE陽性表達(dá)，3d達(dá)到高峰，隨后開始下降。對照組和假手術(shù)組也有微量表達(dá)。 [結(jié)論]: 1.成功的創(chuàng)建了改進(jìn)的Feeney's自由落體打擊動物