探索非裔美國人外周血中預測類風濕關節(jié)炎影像學嚴重程度的標志物.pdf

1、目的:
　　類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid Arthrtitis，RA)患者的臨床表型從輕微關節(jié)炎癥到嚴重關節(jié)破壞具有明顯的個體差異。在疾病早期即出現(xiàn)關節(jié)侵蝕的患者往往更快進展為關節(jié)破壞、功能障礙甚至死亡。早期接受積極強化和個體化的治療，能在很大程度上限制關節(jié)破壞并減緩疾病進程。然而，目前人們對影響患者出現(xiàn)差異表型的因素理解不足，臨床上也沒有可靠的生物學標記物用于預測和識別快速發(fā)展成為嚴重關節(jié)破壞的高風險人群。探索影響RA疾病

2、嚴重程度的因素在各種族尤其是非裔美國人群中的研究較少。因此，本研究的目的是通過檢測非裔美國人外周血單個核細胞(Peripheral Blood MononuclearCells，PBMCs)中基因表達水平，探索預測RA影像學嚴重程度的生物標志物。
　　方法:
　　本研究分三個部分:
　　(1)免疫相關基因表達譜分析。選取40名在病程和影像學嚴重程度方面具有極端表型的RA患者及20名健康對照者，采集外周血標本，用PAXg

3、ene Blood RNA Kit提取外周血中總RNA并通過Agilent RNA6000 Nano Kit檢測RNA的質(zhì)量和濃度，然后用High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后使用QIAGEN RT2 Profiler PCR Arrays System通過實時定量聚合酶鏈式反應(Quantitative real-time PCR，qPCR)檢測上述60

4、個樣本的免疫相關基因表達譜，并進行基因的信號通路富集分析;
　　(2)小樣本驗證實驗。根據(jù)關節(jié)破壞程度選取70名RA患者（分為輕、中、重三個組）及48名健康對照者，用同樣的方法提取PBMCs RNA標本，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，使用TaqMan(R) gene expressionassays通過qPCR方法檢測5個基因(γ干擾素受體1和2、趨化因子受體CXCR3、原癌基因MYC和FYN)的表達水平，分析基因表達與RA影像學嚴重程度的

5、相關性;(3)大樣本驗證實驗。選取580名關節(jié)破壞程度不同的RA患者及51名健康對照者，用同樣的方法獲得cDNA樣本并采用qPCR檢測基因IFNGR1和IFNGR2的表達水平，分析基因表達與RA影像學嚴重程度的相關性。該研究納入的患者和對照者均來自“非裔美國人早期類風濕關節(jié)炎患者縱向評價聯(lián)合項目(Consortium for the Longitudinal Evaluation of African-Americanswith Rhe

6、umatoid Arthritis，CLEAR)”。RA患者的影像學嚴重程度由四肢的Sharp/van der Heijde評分決定。
　　結(jié)果:
　　第一部分:(1)不同疾病嚴重程度的非裔美國RA患者具有不同的外周血免疫相關基因表達模式;(2)細胞因子信號通路、NF-κB通路、絲裂原活化蛋白激酶通路、T細胞受體通路、Toll樣受體通路、TNF信號轉(zhuǎn)導通路等與RA的嚴重程度密切相關。
　　第二部分:(1)非裔美國RA患

7、者外周血中IFNGR1，CXCR3，MYC和FYN基因的表達水平與RA影像學嚴重程度無明顯相關性;(2)非裔美國RA患者外周血中IFNGR2基因表達水平與RA影像學嚴重程度顯著相關，且其表達水平越高，疾病越嚴重。
　　第三部分:(1)與健康對照組相比，IFNGR1和IFNGR2基因在非裔美國RA患者外周血中的表達水平顯著升高;(2) IFNGR2基因表達水平與非裔美國RA患者的疾病嚴重程度密切相關，而IFNGR1與之不相關;(3)