空腸彎曲菌外膜蛋白PEB1介導(dǎo)的重組BCG與上皮細(xì)胞結(jié)合能力的研究.pdf

1、背景:
　　疫苗在預(yù)防和治療人類多種疫癥的過程中發(fā)揮了不可磨滅的作用。其中，基因工程重組活載體疫苗因其能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生體液、細(xì)胞甚至黏膜免疫而受到廣大研究者的關(guān)注?；蛑亟M卡介苗（Gene recombinant Bacillus Calmette-Guerin vaccine，rBCG）就是一種單次接種即可持續(xù)誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)靶抗原的免疫應(yīng)答的基因工程疫苗。它的構(gòu)建是利用基因工程學(xué)技術(shù)對(duì)BCG基因進(jìn)行改造使其提高免疫原性，誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)一種或

2、多種疾病的持久防御，以預(yù)防和治療疾病。迄今為止，研究者們已成功制備了多種攜帶不同抗原的rBCG，并將其用于結(jié)核、腫瘤和寄生蟲感染等多種疾病的防治。本研究小組前期已成功構(gòu)建胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型PEB1-Derp2-rBCG的基因重組疫苗。在此研究的基礎(chǔ)上，我們采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，評(píng)價(jià)疫苗PEB1-Derp2-rBCG與上皮細(xì)胞的結(jié)合能力。
　　目的:
　　評(píng)價(jià)PEB1介導(dǎo)的屋塵螨抗原（Derp2）重組BCG疫

3、苗（PEB1-Derp2-rBCG）與人上皮細(xì)胞的結(jié)合能力。
　　實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果:
　　1.胞壁型PEB1-Derp2-rBCG與上皮細(xì)胞的粘附實(shí)驗(yàn)
　　采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，分別將普通BCG、胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEB1-Derp2-rBCG與HeLa細(xì)胞及人類腸黏膜上皮細(xì)胞（HIEC）進(jìn)行共孵育，利用HE和抗酸染色法對(duì)各組細(xì)胞與疫苗的粘附結(jié)果進(jìn)行染色，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)各組的粘附率，并進(jìn)行比較

4、。孵育24小時(shí)后，無論HeLa細(xì)胞還是HIEC，PEB1-Derp2-rBCG組較普通BCG組和Derp2-rBCG組的粘附率明顯提高，差異有顯著性（P<0.05），但是，Derp2-rBCG組與普通BCG組比較沒有明顯差異（P>0.05）。
　　2.胞壁型PEB1-Derp2-rBCG與上皮細(xì)胞的抑制和阻斷實(shí)驗(yàn)
　　采用相同的方法將各組疫苗與細(xì)胞進(jìn)行共孵育，并對(duì)各組分別加入PEB1蛋白或抗PEB1多克隆抗體進(jìn)行粘附抑制和阻