不同給藥途徑對(duì)鼠的潰瘍性結(jié)腸炎模型的療效比較及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：建立一種能直接將5-ASA 灌入病變部位的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。
　　 材料和方法：雄性SD 大鼠72只，隨機(jī)分為T(mén)NBS/ethanol 造模組、模型組及正常組，每組設(shè)24只大鼠。造模組及模型對(duì)照組大鼠的盲腸插入并固定一根軟管，通過(guò)大鼠的皮下穿出于頸上皮膚固定以便灌藥。距盲腸約6cm 結(jié)腸，夾閉約2cm的腸管，用1ml 注射器注入5％ 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS w／V)按100 mg／k

2、g 加入等體積的50％的乙醇造模，2min后放開(kāi)。模型對(duì)照組注入等量的生理鹽水。觀察各組大鼠的糞便、精神狀態(tài)和進(jìn)食情況，并每日稱(chēng)體重。分別于模型誘導(dǎo)后1、3、7、14天后處死大鼠，對(duì)病變部位行肉眼評(píng)分，留取血清，分離結(jié)腸組織，制作病理切片，HE 染色及進(jìn)行相關(guān)的分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果：TNBS 造模組在造模后第1天表現(xiàn)明顯的腸道稀便和血便，持續(xù)約8天，造模后體重明顯減輕，持續(xù)8-10天緩解；造模后第3和7天可以觀察到腸壁明顯增厚、炎癥和潰瘍

3、，病理學(xué)檢查可見(jiàn)黏膜及黏膜下層有大量中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、纖維細(xì)胞浸潤(rùn)，14天腸道的炎性水腫消退，表現(xiàn)為大量的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肉芽組織及隱窩膿腫形成。MPO（myeloperoxidase）活性值及IL-1β（interleukin-1β）、TNF-α（tumornecrosis factor）、IL-6（interleukin-6）炎癥因子在血清和病變腸組織中第1天即開(kāi)始升高，第3和7天達(dá)到峰值，第14天有明顯下降。手術(shù)對(duì)照組

4、在造模后第1天部分稀便，第2天即恢復(fù)正常。正常組大鼠一切正常。
　　 結(jié)論：TNBS 誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的模型已經(jīng)建成，其潰瘍和炎癥及相關(guān)的檢測(cè)指標(biāo)表現(xiàn)為一個(gè)由急性炎癥向慢性炎癥動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程，能維持一段較長(zhǎng)的時(shí)間，盲腸置管對(duì)造模死亡率沒(méi)有明顯影響，可直接將藥物注入大鼠盲腸，且病變范圍較穩(wěn)定，降低了個(gè)體差異性導(dǎo)致的模型不穩(wěn)定，可作為IBD 局部給藥治療研究的有效模型。
　　 第二部分
　　 目的：觀察并比較通

5、過(guò)置管灌注5-ASA、美沙拉嗪（艾迪沙）灌胃、5-ASA 灌胃對(duì)2，4，6-三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的療效。
　　 材料和方法：70只SD 大鼠，按照隨機(jī)原則分為假手術(shù)組（A），模型組（B），5-ASA腸內(nèi)給藥組(C)，美沙拉嗪灌胃組(D)，5-ASA 灌胃組(E),每組14只，造模方法同第一部分。成模后，假手術(shù)組、模型組大鼠給與生理鹽水（2ml，2 次/天），5-ASA 腸內(nèi)給藥組及灌胃組給與5-ASA（2ml，2

6、次/天）（100mg/kg）,艾迪沙灌胃組給與艾迪沙（2ml，2 次/天）（100mg/kg）。共7天。每日記錄體重變化。用藥7天后各組大鼠進(jìn)行心臟采血，留取血清，分離結(jié)腸組織，制作病理切片，HE 染色及進(jìn)行相關(guān)的分子生物學(xué)檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1.與模型組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組結(jié)腸黏膜大體形態(tài)學(xué)損傷評(píng)分及組織學(xué)評(píng)分均明顯下降，且MPO 活性、免疫組化評(píng)分、組織中IL-1β、IL-6、TNF-

7、αmRNA表達(dá)及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明顯下降。5-ASA灌胃組上述指標(biāo)則無(wú)明顯下降。
　　 2.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組結(jié)腸黏膜大體形態(tài)學(xué)損傷評(píng)分及組織學(xué)評(píng)分均明顯下降，且MPO 活性、免疫組化評(píng)分、組織中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明顯下降。
　　 3.與艾迪沙灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥

8、組結(jié)腸黏膜大體形態(tài)學(xué)損傷評(píng)分及組織學(xué)評(píng)分均明顯下降，且MPO 活性、免疫組化評(píng)分、組織中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明顯下降。
　　 結(jié)論：腸內(nèi)直接灌注5-ASA 對(duì)2，4，6-三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用強(qiáng)于艾迪沙灌胃及5-ASA 灌胃的治療作用。
　　 第三部分
　　 目的：應(yīng)用高壓液相色譜法測(cè)定鼠的結(jié)腸、糞便及血清中5-氨基水楊酸

9、含量。
　　 方法：60只SD 大鼠，按照隨機(jī)原則分為假手術(shù)組（Sham operation），模型組（TNBS/ethanol），5-ASA 腸內(nèi)給藥組(Injecting 5-ASA by tube)，美沙拉嗪（艾迪沙）灌胃組(Oral mesalazine)，5-ASA 灌胃組(Oral 5-ASA),每組3只。使用熒光檢測(cè)器，以乙酰5-氨基水楊酸為內(nèi)標(biāo),用衍生化法使樣品中的5-ASA 乙酰化，色譜柱為Nu-cleosil

10、100-5Cl8，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)-乙腈-四氫呋喃(85：10：5)，流速0.9 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。用衍生化使樣品中5-ASA 乙酰化，三氯乙酸沉淀蛋白后上清液直接進(jìn)樣，測(cè)定鼠的血清及結(jié)腸組織及糞便中的濃度。
　　 結(jié)果：
　　 1.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組大鼠血漿中5-ASA含量在各時(shí)間點(diǎn)降低；與艾迪沙灌胃組相比，5-ASA 腸內(nèi)給藥組大鼠血

11、漿中5-ASA含量在各時(shí)間點(diǎn)更低。
　　 2.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組大鼠結(jié)腸組織中5-ASA 含量在各時(shí)間點(diǎn)增高；與艾迪沙灌胃組相比，5-ASA 腸內(nèi)給藥組大鼠結(jié)腸組織中5-ASA 含量在各時(shí)間點(diǎn)更高。
　　 3.與5-ASA 灌胃組相比較，5-ASA 腸內(nèi)給藥組及艾迪沙灌胃組大鼠糞便中5-ASA含量在各時(shí)間點(diǎn)增高；與艾迪沙灌胃組相比，5-ASA 腸內(nèi)給藥組大鼠糞便中5-ASA含