磷脂酰膽堿的分離提取與松蘿酸脂質(zhì)體的研究.pdf

1、本論文分為兩部分開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。第一部分以蛋黃粗磷脂作為原料分離提純得到E80(磷脂酰膽堿PC的含量在80﹪以上)以及深加工產(chǎn)品E98(磷脂酰膽堿PC的含量在98﹪以上)，并對(duì)兩種產(chǎn)品的質(zhì)量做出評(píng)價(jià)。E80的質(zhì)量評(píng)價(jià)包括酸值、碘值、皂化值、有關(guān)物質(zhì)、水分等；E98的質(zhì)量評(píng)價(jià)除包括上述E80各檢測(cè)項(xiàng)之外，用<'1>H-NMR和<'13>C-NMR圖譜對(duì)PC的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確證。并用HPLC分析了兩種產(chǎn)品中各磷脂組分的種類和含量。第二部分是使用第一部

2、分分離提純得到的E98，與膽固醇篩選合適的配方包埋藥物松蘿酸制備松蘿酸脂質(zhì)體。對(duì)松蘿酸脂質(zhì)體進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，包括粒徑測(cè)量、藥脂比大小、載藥量高低、包封率高低等。并對(duì)貯藏了一個(gè)月的脂質(zhì)體進(jìn)行了穩(wěn)定性研究。 采用有機(jī)溶劑沉淀法對(duì)蛋黃粗磷脂進(jìn)行處理。依次用丙酮和無(wú)水乙醇溶解浸泡該磷脂粗品，過(guò)濾除去不溶性雜質(zhì)；用重蒸丙酮沉淀得到成品粗品；用活性炭進(jìn)行脫色處理；95﹪乙醇進(jìn)行精制；重蒸丙酮二次沉淀后在凍干設(shè)備上凍干制得成品。按2005年版《

3、中華人民共和國(guó)藥典》有關(guān)規(guī)定對(duì)成品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。經(jīng)分析采用有機(jī)溶劑沉淀法制備的成品各質(zhì)量參數(shù)均符合寶雞力邦生物工程有限公司的企業(yè)內(nèi)部自控標(biāo)準(zhǔn)。產(chǎn)品性能達(dá)到了德國(guó)Lipoid公司生產(chǎn)的E80產(chǎn)品的水平，完全可以替代該產(chǎn)品使用。 將制得的E80作為原料，采用柱層析色譜法深加工得到高純磷脂產(chǎn)品E98。上柱的洗脫液采用氯仿和甲醇的混合溶媒。TLC進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果作為更換洗脫液中氯仿和甲醇比例的判斷依據(jù)。將沈脫液按所含物質(zhì)種類的不同

4、分批收集濃縮后脫色，在重蒸丙酮中沉淀、凍干設(shè)備上凍干制得成品E98。按E80的相關(guān)步驟對(duì)深加工產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。結(jié)果得到的成品純度在98﹪以上。用核磁共振儀對(duì)E98進(jìn)行<'1>H-NMR和<'13>C-NMR的分析確定了其結(jié)構(gòu)。 將E98和膽固醇作為基礎(chǔ)原料，篩選合適的配方工藝制備松蘿酸脂質(zhì)體，并評(píng)價(jià)了其質(zhì)量。建立了松蘿酸脂質(zhì)體的HPLC色譜條件和包封率的測(cè)定方法。HPLC色譜條件是用C<,18>反相色譜柱，(250mm×4.6

5、mm，5μ)，流動(dòng)相組成為甲醇：PBS(pH為5.0左右)=70：30(體積比)，流速為lml/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。包封率的測(cè)定方法是用自制的Sephadex G-25葡聚糖微型凝膠色譜柱分離脂質(zhì)體和游離藥物，蒸餾水作為洗脫劑，用HPLC檢測(cè)脂質(zhì)體中藥物和游離藥物的含量，計(jì)算出松蘿酸脂質(zhì)體的包封率。結(jié)果表明，E98和膽固醇以70∶30(mol∶mol)為配方制備的脂質(zhì)體，可以包封松蘿酸藥量達(dá)1mg/50mg左右，脂質(zhì)體的粒