礦質(zhì)元素對丹參次生代謝物積累的影響與調(diào)控.pdf

1、丹參，為唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根及根莖，是我國的傳統(tǒng)中藥和大宗藥材之一。丹參對心腦血管疾病的治療和抗氧化等方面療效顯著，同時丹參的藥理活性成分已經(jīng)基本清楚，其活性成分可以分為水溶性的迷迭香酸、丹酚酸、原兒茶醛和丹參素等，以及脂溶性的二萜醌類化合物丹參酮類和對醌型的羅列酮類。
　　添加誘導(dǎo)子被認(rèn)為是能夠有效提高藥用植物次生代謝產(chǎn)物合成最有效的方法之一。本文以紫花丹參毛狀根為實驗材料

2、，通過組織培養(yǎng)的方法，篩選不同種類的誘導(dǎo)物來獲得可以促進(jìn)丹參毛狀根中有效成分積累的誘導(dǎo)子。選用的誘導(dǎo)子包括重金屬類的鎳元素，植物生長必需元素磷和有益元素硒，稀土元素鈰和釹。在確定可以促進(jìn)誘導(dǎo)丹參有效成分積累的誘導(dǎo)物后，進(jìn)一步利用該誘導(dǎo)子對丹參毛狀根進(jìn)行時間梯度的誘導(dǎo)實驗，測定丹參有效成分合成途徑中各關(guān)鍵酶基因的表達(dá)以及保護(hù)酶的活性，探討誘導(dǎo)子對丹參有效成分合成的調(diào)控機(jī)制，并對低磷誘導(dǎo)條件下的響應(yīng)基因SmSPX進(jìn)行生物信息學(xué)分析。

3、　　本實驗主要研究結(jié)果如下:
　　1.不同誘導(dǎo)子對丹參毛狀根次生代謝物含量的影響:丹參毛狀根在10μM NiSO4的誘導(dǎo)下，丹參酮ⅡA，隱丹參酮，二氫丹參酮Ⅰ和丹參酮Ⅰ的合成均受到促進(jìn);上述4種丹參酮的合成量在0.1，0.5，1 mM Na2SeO3的誘導(dǎo)處理時提高;100μM的Nd(NO3)3誘導(dǎo)處理可以促進(jìn)丹參脂溶性成分的合成;50μM的Ce(NO3)3處理可以顯著促進(jìn)二氫丹參酮Ⅰ和隱丹參酮的合成;在培養(yǎng)基中磷濃度為對照組的1

4、％(0.0124 mmol/L)脅迫處理下，迷迭香酸、丹酚酸B、丹參素、咖啡酸和阿魏酸，以及上述4種丹參酮的合成均受到促進(jìn)。
　　2.以50μM的Ce(NO3)3為誘導(dǎo)條件對丹參毛狀根進(jìn)行時間梯度的誘導(dǎo)培養(yǎng)，可以得出:相對于對照組，50μM的Ce(NO3)3可以有效促進(jìn)丹參毛狀根中二氫丹參酮Ⅰ和隱丹參酮的積累，通過對丹參酮合成途徑上關(guān)鍵基因表達(dá)的分析，推測二氫丹參酮Ⅰ和隱丹參酮的合成可能與丹參酮ⅡA和丹參酮Ⅰ不在同一條代謝途徑。此

5、外，50μM Ce3+的誘導(dǎo)可以提高POD活性，然而對SOD的活性沒有顯著影響。
　　3.以培養(yǎng)基中磷濃度為對照組的1％(0.0124 mmol/L)作為誘導(dǎo)條件對丹參毛狀根進(jìn)行時間梯度的誘導(dǎo)培養(yǎng)，可以得出:低磷會阻礙毛狀根干物質(zhì)的積累，抑制毛狀根的生長，并推測在低磷條件下毛狀根干物質(zhì)的積累是一個較長期的過程。在誘導(dǎo)期間（15-27天），對照組1％濃度的磷處理可以有效促進(jìn)水溶性成分迷迭香酸、丹酚酸B、丹參素、咖啡酸和阿魏酸的積累，