OSF癌變侵襲轉(zhuǎn)移的臨床研究及其與Wnt途徑異常激活關(guān)系的初步研究.pdf

1、口腔黏膜下纖維性變（oral submuc ous fibrosis，OSF）是一種慢性、隱匿性、與咀嚼檳榔有關(guān)的口腔黏膜疾病，OSF可以癌變成口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）。臨床上觀察到此類患者的局部復(fù)發(fā)與頸部淋巴轉(zhuǎn)移率要高于其它非OSF癌變鱗癌，預(yù)后較差，提示OSF癌變鱗癌可能存在有別于非OSF癌變鱗癌不同的生物學(xué)行為，然而目前關(guān)于OSF癌變鱗癌生物學(xué)行為的臨床與基礎(chǔ)研究甚少。

2、 Wnt途徑是一類在生物體進(jìn)化過程中高度保守的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，調(diào)節(jié)控制著眾多生命活動過程，對細(xì)胞增殖和分化具有重要調(diào)節(jié)作用，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有密切的關(guān)系，最近幾年針對Wnt途徑與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究開始引起關(guān)注，卻未見Wnt途徑在OSF癌變鱗癌中的研究。 目的：本文旨在對OSF癌變鱗癌生物學(xué)行為進(jìn)行臨床與機(jī)制研究。通過已被確診的OSF癌變鱗癌臨床病例，對OSF癌變鱗癌病例與非OSF癌變鱗癌病例的臨床特點(diǎn)與生物學(xué)行為進(jìn)行

3、對比研究，以補(bǔ)充與完善關(guān)于OSF癌變生物學(xué)行為方面的臨床研究；采用免疫組化SP法以及熒光實(shí)時定量RT-PCR法對Wnt途徑的幾個關(guān)鍵分子在OSF癌變鱗癌等組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測，觀察其在mRNA水平及蛋白表達(dá)水平的改變，從而探討Wnt信號途徑在OSF癌變鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制中可能發(fā)揮的作用；通過比較不同手術(shù)方式治療OSF癌變鱗癌病例后對其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率控制的優(yōu)劣，提出手術(shù)治療OSF癌變鱗癌的推薦術(shù)式，以提高OSF癌變鱗癌患者的生存時間及生活質(zhì)量。

4、 材料與方法：對2002年1月～2008年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院口腔頜面外科病房經(jīng)手術(shù)治療的口腔黏膜鱗癌患者進(jìn)行回顧性分析，將其病例分為OSF癌變鱗癌組及非OSF癌變鱗癌組。對其病例分布、發(fā)病部位、臨床特征、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等進(jìn)行統(tǒng)計比較分析；采用免疫組化SP法對52例OSF癌變鱗癌與48例非OSF癌變鱗癌組織及其癌旁組織的石蠟包埋切片進(jìn)行染色，檢測組織中β-catenin、Wnt2、E-cadherin、TCF-4以及CD4

5、4v6的蛋白表達(dá)水平的改變；采用實(shí)時熒光定量RT-PCR方法檢測OSF癌變鱗癌組織與非OSF癌變鱗癌組織及各自癌旁組織中β-catenin、E-cadherin及TCF-4的mRNA水平的變化；收集45例OSF癌變鱗癌患者，對其中25例采用原發(fā)灶擴(kuò)大癌旁組織、與頸部淋巴組織連續(xù)垂直切除、個體化皮瓣修復(fù)的手術(shù)方法并與傳統(tǒng)手術(shù)方法進(jìn)行臨床療效觀察比較研究，將其研究結(jié)果供臨床應(yīng)用。所得結(jié)果通過統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

6、 結(jié)果：一.OSF癌變鱗癌組復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率（43.12％）高于非OSF癌變鱗癌（30.77％），預(yù)后較差；組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。 二.β-catenin的易位表達(dá)1.正常口腔粘膜組織中，β-catenin的表達(dá)為細(xì)胞膜陽性（強(qiáng)染色率93.33％）； 2.OSF癌變鱗癌組織呈現(xiàn)β-catenin胞膜染色減少乃至消失（強(qiáng)染色率7.69％），非OSF癌變鱗癌組織亦存在β-catenin胞膜染色減少（強(qiáng)染色率20％），

7、二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；OSF癌變鱗癌組織β-catenin胞漿內(nèi)積聚率達(dá)61.5％，非OSF癌變鱗癌組織則達(dá)57.8％，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；OSF癌變鱗癌組織β-catenin核易位率達(dá)59.6％，非OSF癌變鱗癌組織則未發(fā)現(xiàn)β-catenin的核易位現(xiàn)象； 3.OSF癌變鱗癌癌旁組織與非OSF癌變鱗癌癌旁組織比較，β-catenin包膜強(qiáng)染色率差別有統(tǒng)計學(xué)意義（分別為57.7％，86.7％，P

8、<0.01）： 4.熒光實(shí)時定量RT-PCR結(jié)果：OSF癌變鱗癌組織（1.10）與非OSF癌變鱗癌組織（1.70）之間β-cateninmRNA表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；OSF癌變鱗癌癌旁組織（0.87）與非OSF癌變鱗癌癌旁組織（0.85）之間β-cateninmRNA表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 三.Wnt2的異常表達(dá)1.正常口腔粘膜組織中，Wnt2表達(dá)為陰性； 2.OSF癌變鱗癌組

9、織可見Wnt2的高表達(dá)（染色率達(dá)78.84％）與非OSF癌變鱗癌組織的44％相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；OSF癌變鱗癌癌旁組織Wnt2染色率為34.62％，而非OSF癌變鱗癌癌旁組織無Wnt2染色； 3.Wnt2的表達(dá)與β-catenin膜染色呈負(fù)相關(guān)（r=-0.956，P=0.011），與β-catenin胞漿積聚呈正相關(guān)。 四.E-cadherin的表達(dá)1.正常口腔粘膜組織中，E-cadherin的表達(dá)為

10、細(xì)胞膜陽性，強(qiáng)染色率達(dá)93.33％； 2.OSF癌變鱗癌組織中E-cadherin膜表達(dá)明顯減少，強(qiáng)染色率3.85％；非OSF癌變鱗癌組織中E-cadherin強(qiáng)染色率53.33％，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；OSF癌變鱗癌癌旁組織中E-cadherin強(qiáng)染色率57.69％，非OSF癌變鱗癌癌旁組織E-cadherin強(qiáng)染色率64.44％，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）； 3.膜E-cadherin與β-

11、catenin的膜表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.962，P=0.038），Wnt2與膜E-cadherin的減少或消失存在負(fù)相關(guān)（r=-0.919，P=0.027），β-catenin的易位與膜E-cadherin的減少具有伴隨關(guān)系。 4.熒光實(shí)時定量RT-PCR結(jié)果：OSF癌變鱗癌組、OSF癌變鱗癌癌旁組、非OSF癌變鱗癌組、非OSF癌變鱗癌癌旁組等4組中E-cadherinmRNA表達(dá)水平均低于正常黏膜組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.

12、01），但4組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 五.TCF-4及CD44v6的表達(dá)1.正?？谇徽衬ぶ校琓CF-4的表達(dá)表現(xiàn)為細(xì)胞核弱陽性（20％）；CD44v6的表達(dá)表現(xiàn)為細(xì)胞膜陽性（40％）； 2.TCF-4在OSF癌變鱗癌組織染色率69.23％，在非OSF癌變鱗癌組織48.89％，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；TCF-4在OSF癌變鱗癌癌旁組織染色率50％，在非OSF癌變鱗癌癌旁組織22.22％，二者差異

13、有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）； 3.CD44v6在OSF癌變鱗癌組織染色率40％，在非OSF癌變鱗癌組織82.7％，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；CD44v6在OSF癌變鱗癌癌旁組織染色率57.7％，在非OSF癌變鱗癌癌旁組織48.89％，二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）； 4.CD44v6的表達(dá)與TCF-4呈正相關(guān)（r=0.949，P=0.014）。 5.熒光實(shí)時定量RT-PCR結(jié)果：OSF癌變鱗癌

14、TCF-4mRNA表達(dá)量較其它4組高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），其它各組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 六.采用擴(kuò)大癌旁組織切除、原發(fā)灶與頸部淋巴組織連續(xù)垂直切除、個體化皮瓣修復(fù)等與傳統(tǒng)治療手段相比，可以明顯減少OSF癌變鱗癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率（分別為12％與40％）； 結(jié)論：一.OSF癌變鱗癌臨床上表現(xiàn)為更具侵襲性和轉(zhuǎn)移性的生物學(xué)行為； 二.Wnt途徑在OSF癌變鱗癌中處于異?；罨癄顟B(tài)； 三.O