JAK2V617F突變?cè)贛PD中的發(fā)生情況及伊馬替尼、干擾素、大蒜素對(duì)HEL細(xì)胞增殖、凋亡和基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：1.檢測(cè)JAK2V617F基因突變?cè)贛PD和MDS中的發(fā)生情況。2.觀察不同濃度的伊馬替尼、干擾素和大蒜素對(duì)JAK2V617F基因突變HEL細(xì)胞株生長(zhǎng)、凋亡和基因表達(dá)的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)分兩部分 （一）46例MPD患者，9例MDS患者。MPD患者中PV患者26例，ET患者20例，10例對(duì)照為自愿健康者。研究方法：1.提取患者外周血和骨髓細(xì)胞基因組DNA。2.應(yīng)用等位基因特異性PCR技術(shù)擴(kuò)增JAK2基因第14號(hào)外顯子

2、。3.對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，回收J(rèn)AK2V617F突變陽(yáng)性患者的PCR產(chǎn)物并測(cè)序。4.觀察JAK2V617F突變陽(yáng)性和陰性患者的外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)。 （二）將不同濃度的伊馬替尼、干擾素、大蒜素作用于HEL細(xì)胞系，MTT觀察藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響，PI單染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，熒光定量PCR檢測(cè)JAK2V617F突變基因的表達(dá)水平。 結(jié)果：46例MPD患者中共檢出31例JAK2V617F突變陽(yáng)性，總陽(yáng)性率67.39

3、％；其中PV26例，陽(yáng)性率為76.92％；ET20例，陽(yáng)性率為55.00％；MDS患者9例，陽(yáng)性率為22.22％。各組患者的外周血和骨髓的JAK2V617F突變陽(yáng)性率相同。健康者10例，未檢測(cè)到JAK2V617F突變陽(yáng)性。陽(yáng)性患者的PCR產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序顯示突變位點(diǎn)相同。PV突變陽(yáng)性患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白較突變陰性患者的高，差別具有顯著性；突變陽(yáng)性患者的血小板計(jì)數(shù)較突變陰性患者的高，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ET突變陽(yáng)性患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)較突變陰性

4、患者的高，差別具有顯著性；突變陽(yáng)性患者的血紅蛋白較突變陰性患者的高，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，突變陽(yáng)性患者的血小板計(jì)數(shù)較突變陰性患者的低，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 伊馬替尼、干擾素及大蒜素對(duì)HEL細(xì)胞增殖均有抑制作用，呈劑量依賴性。觀察藥物作用72h時(shí)的細(xì)胞增殖抑制率：不同濃度的伊馬替尼各組之間差別均有顯著性（P<0.05）。不同濃度的干擾素組，除5×105u/L與10×105u/L組之間P=0.251外，其余各組之間差別均有顯著性（P<0.

5、05）。不同濃度的大蒜素組，除5mg/L與10mg/L組之間P=0.145外，其余各組之間差別均有顯著性（P<0.05）。干擾素及大蒜素對(duì)HEL細(xì)胞均有明顯促凋亡作用，隨濃度增加HEL細(xì)胞凋亡率增加，而伊馬替尼誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用不明顯，大蒜素在較低濃度時(shí)即表現(xiàn)出較高的凋亡率，在50mg/L時(shí)對(duì)HEL細(xì)胞的凋亡率已達(dá)88.54±2.92。干擾素、大蒜素隨作用時(shí)間延長(zhǎng)HEL細(xì)胞JAK2V617F突變基因表達(dá)水平均有下降，干擾素在100×105

6、u/L濃度時(shí)作用24h、48h、72hJAK2 V617F/GAPDH熒光定量分別為：1.556、1.213、0.870；大蒜素在10mg/L濃度時(shí)作用24h、48h、72hJAK2 V617F/GAPDH熒光定量分別為：1.139、0.943、0.747；伊馬替尼變化不明顯，20.0umol/L濃度時(shí)作用24h、48h、72hJAK2/GAPDH熒光定量分別為：1.016、2.019、3.022。 結(jié)論：1.JAK2V617F

7、突變?cè)谒鶛z測(cè)MPD患者中發(fā)生率較高，其中PV患者的發(fā)生率最高，ET患者其次。部分MDS患者中也有JAK2V617F突變。 2.各組患者的外周血和骨髓的JAK2V617F突變陽(yáng)性率一致。 3.JAK2V617F檢測(cè)有助于MPD的診斷，PV突變陽(yáng)性患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白較突變陰性患者的高，差別具有顯著性，ET突變陽(yáng)性患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)較突變陰性患者的高，差別具有顯著性。 4.伊馬替尼、干擾素、大蒜素對(duì)JAK2V61