TNFSF15抑制小鼠顱內(nèi)血管母細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)及出血.pdf

1、目的:手術(shù)切除是治療人的顱內(nèi)血管母細(xì)胞瘤的最佳方式，但是生長(zhǎng)在關(guān)鍵部位（例如顱底或者腦干）及顱內(nèi)多發(fā)的血管母細(xì)胞瘤阻礙的手術(shù)的實(shí)施，并且當(dāng)前沒(méi)有一種有效的藥物治療方式。通過(guò)一種有效的化學(xué)藥物，來(lái)抑制血管母細(xì)胞瘤的異常過(guò)多增生的血管，也許能能夠成為一種有效的治療方式。
　　方法:通過(guò)免疫組織化學(xué)染色來(lái)檢測(cè)人的血管母細(xì)胞瘤的VEGF/TNFSF15及小膠質(zhì)/巨噬細(xì)胞的表達(dá)。利用bEnd.3細(xì)胞立體定向注射到小鼠的基底節(jié)，建立小鼠的血管

2、母細(xì)胞瘤模型。通過(guò)HE染色來(lái)評(píng)價(jià)血管瘤及出血的體積，ELISA檢測(cè)VEGF/TNFSF15的表達(dá)水平，CD68+，7/4+等免疫熒光染色分析炎性細(xì)胞對(duì)血管瘤的浸潤(rùn)情況。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染bEnd.3細(xì)胞，致使該細(xì)胞高表達(dá)TNFSF15，通過(guò)RT-PCR，Western blotting及ELISA，分析VEGF/TNFSF15的表達(dá)水平。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和管腔形成實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)bEnd.3細(xì)胞的體外血管新生能力。
　　結(jié)果:腫瘤壞死因子超家族

3、成員-15（TNFSF15，又名血管內(nèi)皮生長(zhǎng)抑制因子）被認(rèn)為是一種抗血管新生的因子，TNFSF15能夠抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)分裂期血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，抑制血管內(nèi)皮祖細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。通過(guò)免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，TNFSF15在正常人的微血管結(jié)構(gòu)中高度表達(dá)，但是在人的血管母細(xì)胞瘤內(nèi)極低的表達(dá)，上調(diào)血管母細(xì)胞瘤的TNFSF15也許能成為治療該病的有效靶點(diǎn)。來(lái)源于小鼠內(nèi)皮瘤的bEnd.3細(xì)胞系能夠分泌大量的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEG

4、F)，VEGF不但能夠促進(jìn)血管的生長(zhǎng)也能促進(jìn)血管的滲漏，但是b.End3細(xì)胞表達(dá)極少量的TNFSF15，研究發(fā)現(xiàn)bEnd.3細(xì)胞能在小鼠的皮下組織形成穩(wěn)定的血管瘤。我們把b.End3細(xì)胞移植到C57BL/6小鼠的顱內(nèi)，能形成與人的血管母細(xì)胞瘤病理結(jié)構(gòu)極其相似的小鼠的顱內(nèi)細(xì)胞瘤。與對(duì)照組相比，當(dāng)把bEnd.3細(xì)胞移植到高TNFSF15表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠顱內(nèi)，能夠形成較小體積的血管瘤和能減少血管瘤的出血，并且伴有較少的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和增多的周細(xì)

5、胞募集。更重要的是，在TNFSF15高表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠中，能夠下調(diào)血管瘤中VEGF的表達(dá)水平。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染bEnd.3細(xì)胞，促使bEnd.3細(xì)胞高表達(dá)TNFSF15，亦能發(fā)現(xiàn)抑制血管瘤的生長(zhǎng)和出血，并也能下調(diào)VEGF的表達(dá)。體外研究亦證實(shí)TNFSF15能夠抑制bEnd.3細(xì)胞的生長(zhǎng)和下調(diào)VEGF的分泌。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用死亡受體-3（DR-3）的拮抗劑來(lái)封閉DR-3的功能，發(fā)現(xiàn)TNFSF15不能發(fā)揮抑制bEnd.3細(xì)胞增殖和不

6、能下調(diào)VEGF的表達(dá)，為此我們推論TNSF15能夠通過(guò)DR3受體下調(diào)VEGF的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制血管瘤的生長(zhǎng)及出血的發(fā)生。
　　結(jié)論:與正常的腦的微血管相比，我們發(fā)現(xiàn)在人的血管母細(xì)胞瘤標(biāo)本中，存在高VEGF表達(dá)和極低TNFSF15表達(dá)的模式，這種異常的表達(dá)模式可能誘導(dǎo)了或者加重了血管母細(xì)胞瘤疾病的發(fā)生發(fā)展。在小鼠的顱內(nèi)血管瘤的模型中，TNFSF15能夠抑制血管瘤的生長(zhǎng)和減少出血的發(fā)生，抑制血管瘤周圍炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)和促進(jìn)周細(xì)胞的募集